西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）為瓜類細(xì)菌性果斑�。╞acterial fruit blotch,BFB）病原菌,菌體形態(tài)特征為單根極生鞭毛,不產(chǎn)生熒光并且好氧類細(xì)菌,革蘭氏染色陰性。果斑病是世界范圍內(nèi)的細(xì)菌性檢疫病害,為中國出入境重點檢疫對象,其主要通過種子帶菌傳播的方式,對世界各地的西瓜、甜瓜等葫蘆科作物造成嚴(yán)重的危害,對產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟帶來巨大的損失。細(xì)菌中的c-di-GMP信號途徑和雙組分調(diào)控系統(tǒng)是兩個復(fù)雜且又截然不同的生理過程,細(xì)菌的毒性、運動性及生物膜形成能力對致病性的影響至關(guān)重要。本試驗從c-diGMP信號調(diào)控和雙組分信號調(diào)控這兩個角度來研究基因Aave₂620及phoB與phoR對致病性相關(guān)表型的影響。我們分析了Aave₂620,phoB與phoR基因生物信息學(xué),包括結(jié)構(gòu)域功能,還通過三親本雜交及同源重組雙交換,成功構(gòu)建Aave₂620,phoB與phoR基因的單基因缺失突變菌株ΔAave₂620、ΔphoB、ΔphoR和回補菌株ΔAave₂620c... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 果斑病及西瓜噬酸菌簡介
        1.1.1 果斑病簡介
        1.1.2 西瓜噬酸菌簡介
        1.1.3 西瓜噬酸菌常見調(diào)控系統(tǒng)及調(diào)控因子
        1.1.4 西瓜噬酸菌的檢測與防治
    1.2 C-di-GMP信號傳導(dǎo)系統(tǒng)
        1.2.1 C-di-GMP信號調(diào)節(jié)機理
        1.2.2 C-di-GMP的胞內(nèi)分布及影響
        1.2.3 C-di-GMP對細(xì)菌致病相關(guān)表型的調(diào)控
    1.3 雙組分信號傳導(dǎo)系統(tǒng)
        1.3.1 雙組分信號傳導(dǎo)系統(tǒng)簡介
        1.3.2 TCS感應(yīng)信號特征及傳導(dǎo)方式
        1.3.3 TCS對細(xì)菌致病性的影響
    1.4 Pho B/Pho R蛋白相關(guān)研究
    1.5 實驗內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.5.1 實驗內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
    1.6 研究目的及意義
第二章 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB與 phoR基因生物信息學(xué)分析
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 西瓜噬酸菌基因Aave_2620、phoB與 phoR基本信息
        2.2.2 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB與 phoR基因結(jié)構(gòu)域預(yù)測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 西瓜噬酸菌Aave_2620生物信息學(xué)分析
        2.3.2 西瓜噬酸菌phoB生物信息學(xué)分析
        2.3.3 西瓜噬酸菌phoR生物信息學(xué)分析
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 西瓜噬酸菌Aave_2620、phoB與 phoR突變株構(gòu)建及功能分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株及質(zhì)粒
        3.1.2 儀器及設(shè)備
        3.1.3 試劑及抗生素
        3.1.4 培養(yǎng)基的種類及制備
        3.1.5 試驗植株
    3.2 實驗方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 構(gòu)建單突變菌株ΔAave_2620、ΔphoB及 ΔphoR
        3.2.3 互補菌株的獲取
        3.2.4 致病性測定
        3.2.5 煙草致敏性
        3.2.6 運動能力的測定
        3.2.7 生物膜形成能力測定
        3.2.8 體內(nèi)、外生長能力測定
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 重組及互補載體的構(gòu)建
        3.3.2 突變株及互補菌株篩選與獲取
        3.3.3 致病性測定結(jié)果
        3.3.4 煙草過敏性反應(yīng)測定結(jié)果
        3.3.5 運動性測定結(jié)果
        3.3.6 生物膜形成能力測定結(jié)果
        3.3.7 體內(nèi)、外生長能力測定結(jié)果
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 相關(guān)基因表達(dá)量測定與分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試菌株
        4.1.2 試劑及儀器
    4.2 方法
        4.2.1 qRT-PCR引物設(shè)計
        4.2.2 供試菌株RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.2.3 三型分泌系統(tǒng)及毒力相關(guān)基因表達(dá)量測定
        4.2.4 鞭毛相關(guān)基因表達(dá)量測定
        4.2.5 目的基因之間調(diào)控關(guān)系測定
        4.2.6 數(shù)據(jù)分析
    4.3 測定結(jié)果
        4.3.1 致病相關(guān)基因表達(dá)量測定結(jié)果
        4.3.2 目的基因之間調(diào)控關(guān)系測定結(jié)果
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 西瓜噬酸菌phoB/phoR雙缺失突變株構(gòu)建及功能分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 菌株及質(zhì)粒
        5.1.2 儀器及設(shè)備
        5.1.3 抗生素種類
        5.1.4 培養(yǎng)基制備
        5.1.5 植株材料
    5.2 實驗方法
        5.2.1 實驗相關(guān)引物設(shè)計
        5.2.2 雙缺失突變株ΔphoB/phoR構(gòu)建
        5.2.3 供試菌株RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        5.2.4 接種實驗
        5.2.5 煙草致敏性測定
        5.2.6 致病相關(guān)基因表達(dá)量測定
        5.2.7 測定運動性
        5.2.8 測定生物膜
        5.2.9 測定生長能力
        5.2.10 數(shù)據(jù)分析
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 上下游片段克隆
        5.3.2 突變株篩選及獲得
        5.3.3 致病性測定結(jié)果
        5.3.4 煙草致敏性測定結(jié)果
        5.3.5 致病相關(guān)基因表達(dá)量測定結(jié)果
        5.3.6 運動能力測定結(jié)果
        5.3.7 生物膜形成能力測定結(jié)果
        5.3.8 體內(nèi)、外生長能力測定結(jié)果
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 全文結(jié)論及展望
    6.1 Aave_2620、phoB與 phoR之間存在調(diào)控關(guān)系
    6.2 基因Aave_2620的缺失,使野生型菌株致病力降低
    6.3 基因phoB與 phoR的單缺失,對致病相關(guān)影響有差異
    6.4 phoB與 phoR的雙缺失,使Aac5 菌株致病力顯著增強
    6.5 展望
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



本文編號：3704326