發(fā)布時間：2022-10-29 18:09

　　白樺（Betula Platyphylla Suk.）作為中國東北地區(qū)重要的林木之一,單性花,雌雄同株,同年生雌雄花花期不遇,極具研究價值。天然的白樺雄花突變體為本實(shí)驗(yàn)的研究材料,該突變體有兩種雄花序,一種與野生型一致著生在枝條頂端,命名為normal-like male（NLM）,另一種著生在枝條中部,命名為mutant male（MM）,兩種雄花序均敗育。將突變體的兩種雄花和野生型雄花normal male（NM）進(jìn)行細(xì)胞學(xué)觀察并劃分了6個發(fā)育階段。結(jié)果表明,在越冬時期的第5階段,野生型雄花序的絨氈層細(xì)胞已開始程序性死亡,而突變體兩種雄花絨氈層細(xì)胞程序性死亡過程發(fā)生延遲。最終,在授粉階段,野生型雄花有成熟的花粉粒產(chǎn)生,而突變體雄花中,NLM有部分小孢子形成,MM沒有小孢子產(chǎn)生,最終兩種突變體雄花都無法形成有活力的花粉。為了探究突變體花粉敗育的原因,對野生型雄花（NM）和突變體雄花（MM）進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的GO注釋及l(fā)og2（MM/NM）,篩選出10個與雄配子體發(fā)育相關(guān)且在突變體中差異表達(dá)的基因。利用qRT-PCR探究10個基因在雄花發(fā)育的不同階段及根莖葉雌花等組織的表... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 植物雄配子體發(fā)育概況
    1.2 絨氈層的研究進(jìn)展
        1.2.1 絨氈層的功能
        1.2.2 絨氈層發(fā)育的相關(guān)基因
    1.3 AMS轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
    1.4 研究的目的意義
    1.5 研究的技術(shù)路線
2 白樺雄花突變體的細(xì)胞學(xué)觀察
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
3 雄配子體發(fā)育關(guān)鍵基因的篩選
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 藥品配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序及數(shù)據(jù)處理
        3.2.2 CTAB法提取植物RNA
        3.2.3 cDNA第一條鏈的獲得
        3.2.4 雄花發(fā)育相關(guān)基因的qRT-PCR分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 雄配子體發(fā)育相關(guān)基因的差異表達(dá)
        3.3.2 雄配子體發(fā)育相關(guān)基因在白樺不同組織中的表達(dá)分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
4 BpAMS和Bp034892.1基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 載體、菌種及主要試劑
        4.1.2 藥品配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序及數(shù)據(jù)處理
        4.2.2 RNA提取與cDNA第一條鏈的獲得
        4.2.3 BpAMS和Bp034892.1基因克隆
        4.2.4 生物信息學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 BpAMS和Bp034892.1轉(zhuǎn)錄組分析
        4.3.2 白樺總RNA提取
        4.3.3 BpAMS和Bp034892.1的基因克隆
        4.3.4 BpAMS和Bp034892.1生物信息學(xué)分析
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
5 BpAMS和Bp034892.1亞細(xì)胞定位及白樺遺傳轉(zhuǎn)化
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 載體、菌種
        5.1.2 主要試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 BpAMS和Bp034892.1基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 BpAMS和Bp034892.1基因抑制表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.3 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        5.2.4 亞細(xì)胞定位
        5.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化白樺
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 BpAMS和Bp034892.1基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.2 BpAMS和Bp034892.1基因抑制表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.3 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        5.3.4 BpAMS和Bp034892.1基因的亞細(xì)胞定位
        5.3.5 BpAMS和Bp034892.1過表達(dá)及抑制表達(dá)轉(zhuǎn)基因白樺的獲得
        5.3.6 轉(zhuǎn)基因白樺表達(dá)量檢測
        5.3.7 35S::BpAMS-SRDX轉(zhuǎn)基因植株表型觀察
    5.4 討論
    5.5 展望
    5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]煙草和番茄中活性氧介導(dǎo)的絨氈層程序性細(xì)胞死亡影響花粉的發(fā)育[D]. 于世霞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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本文編號：3698174