發(fā)布時(shí)間：2022-10-08 20:27

　　植株發(fā)育的最后一個(gè)階段是葉片的衰老階段,它將葉子中的資源降解并回收,用來維持新器官的生長。蛋白磷酸酶（protein phosphatase,PP）在整個(gè)衰老過程中可以催化蛋白質(zhì)發(fā)生可逆磷酸化反應(yīng),這一現(xiàn)象是葉片中衰老細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在植物中PP2C型蛋白磷酸酶是分布較多的一大類蛋白磷酸酶。前期研究中已經(jīng)篩選出一個(gè)水稻的PP2C型蛋白磷酸酶編碼基因,命名為OsSAPP3（Oryza sativa Senescence-Associated Protein Phosphatase,OsSAPP3）。通過研究發(fā)現(xiàn),CaMV 35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)OsSAPP3異源過表達(dá)導(dǎo)致35S-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因擬南芥無法正常完成生育史,于是我們用可誘導(dǎo)型啟動(dòng)子GVG系統(tǒng)驅(qū)動(dòng)OsSAPP3過表達(dá),獲得轉(zhuǎn)基因水稻和擬南芥用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。1.OsSAPP3基因克隆與轉(zhuǎn)基因材料的獲得我們分別構(gòu)建了GVG-OsSAPP3和Pro_OsSAPP3-GUS植物雙源表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法獲得了相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因水稻和轉(zhuǎn)基因擬南芥。用潮霉素抗性篩選、PCR檢測、熒光定量RT-PCR檢測、G... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物葉片衰老
    1.2 影響葉片衰老因素
        1.2.1 葉齡與生長發(fā)育
        1.2.2 植物激素
        1.2.3 自由基
        1.2.4 不同外界非生物脅迫
    1.3 植物中的蛋白磷酸酶
        1.3.1 蛋白磷酸酶的種類
        1.3.2 蛋白磷酸酶的功能
        1.3.3 植物中PP2Cs的研究進(jìn)展
    1.4 蛋白質(zhì)可逆磷酸化參與葉片衰老調(diào)控過程
    1.5 本研究的研究內(nèi)容和意義
第二章 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 生物試劑
        2.1.3 宿主菌及植物載體
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 克隆基因與雙源表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.2 獲得T0代轉(zhuǎn)基因植物
        2.2.3 轉(zhuǎn)基因植物的純合篩選
        2.2.4 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因水稻的表達(dá)模式分析
        2.2.5 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)外源激素的響應(yīng)
        2.2.6 外源誘導(dǎo)OsSAPP3過表達(dá)后GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因擬南芥表型觀察
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因擬南芥衰老標(biāo)志基因表達(dá)變化分析
        2.2.8 轉(zhuǎn)基因水稻的表型觀察
        2.2.9 轉(zhuǎn)基因水稻衰老標(biāo)志基因表達(dá)變化分析
    2.3 數(shù)據(jù)分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 OsSAPP3基因克隆及植物雙源表達(dá)載體構(gòu)建
        3.1.1 OsSAPP3的基因克隆
        3.1.2 OsSAPP3植物表達(dá)載體構(gòu)建
        3.1.3 ProOsSAPP3-GUS植物表達(dá)載體構(gòu)建
    3.2 轉(zhuǎn)基因植物的獲得
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥基因表達(dá)水平檢測
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因水稻的獲得
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因水稻基因表達(dá)水平檢測
        3.2.5 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因植物的鑒定
    3.3 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因植物啟動(dòng)子活性分析
        3.3.1 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因水稻植物組織表達(dá)特性分析
        3.3.2 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)外源激素的響應(yīng)
    3.4 外源誘導(dǎo)OsSAPP3基因異源過表達(dá)促進(jìn)轉(zhuǎn)基因擬南芥早衰
    3.5 外源誘導(dǎo)OsSAPP3基因異源過表達(dá)影響衰老相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)
    3.6 外源誘導(dǎo)OsSAPP3基因過表達(dá)促進(jìn)GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因水稻葉片早衰
    3.7 外源誘導(dǎo)OsSAPP3過表達(dá)影響轉(zhuǎn)基因水稻中衰老相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)
    3.8 黑暗誘導(dǎo)促進(jìn)GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因水稻葉片衰老加速
    3.9 黑暗誘導(dǎo)后GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因水稻中衰老相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)變化
第四章 討論
    4.1 ProOsSAPP3-GUS轉(zhuǎn)基因水稻組織表達(dá)模式分析與外源激素的響應(yīng)
    4.2 外源DEX誘導(dǎo)促進(jìn)GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因植物發(fā)生早衰
    4.3 GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因植物的基因表達(dá)量分析
    4.4 GVG-OsSAPP3轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)黑暗脅迫的響應(yīng)
參考文獻(xiàn)
致謝
縮略詞表
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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