虹鱒（Oncorhynchus mykiss）為典型的冷水性魚類,因肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富等優(yōu)點,已成為我國鮭鱒魚類主要養(yǎng)殖品種。三倍體雌性虹鱒性腺發(fā)育異常,不能正常產(chǎn)生配子進行繁殖,這不僅能有效減少卵巢發(fā)育階段所需要的能量損失,還避免了在產(chǎn)卵季節(jié)導致的生長停滯、魚肉質(zhì)量下降和高死亡率等情況的發(fā)生,因此,頗受養(yǎng)殖者青睞,全雌三倍體虹鱒也逐漸成為養(yǎng)殖重點。目前國內(nèi)外已從多方面對三倍體雌性虹鱒不育的機制進行研究,但還沒有從生殖細胞角度進行探索,因此,本研究通過原始生殖細胞（PGCs）標記基因Vasa及Dead end（Dnd）,對不同倍性雌性虹鱒胚胎及性腺分化關(guān)鍵時期進行研究,分析兩種基因在二倍體與三倍體雌性虹鱒中的表達量及表達位置變化,從生殖細胞角度探究三倍體雌性虹鱒不育原因,為進一步研究三倍體雌性虹鱒性腺敗育機制提供理論基礎。主要研究結(jié)果如下:1.通過克隆擴增得到虹鱒Dnd基因序列長為1,231 bp,共編碼364個氨基酸。氨基酸多重比對顯示虹鱒Dnd與大鱗大馬哈同源性最高為98.36%,與其他硬骨魚相似度在97.81-44.4%之間。Dnd在進化上非常保守,系統(tǒng)進化樹顯示虹鱒Dnd在硬骨... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 虹鱒概述
        1.1.1 虹鱒簡介
        1.1.2 虹鱒三倍體人工誘導
    1.2 魚類原始生殖細胞概述
        1.2.1 魚類PGCs特征
        1.2.2 魚類PGCs起源
        1.2.3 魚類PGCs遷移
        1.2.4 魚類PGCs可視化
        1.2.5 魚類PGCs應用
        1.2.6 魚類PGCs標記基因
    1.3 Vasa基因研究進展
        1.3.1 Vasa基因結(jié)構(gòu)及序列特征
        1.3.2 Vasa基因在魚類發(fā)育過程中的表達
    1.4 Dnd基因研究進展
        1.4.1 Dnd基因結(jié)構(gòu)及作用機制
        1.4.2 Dnd基因功能
        1.4.3 Dnd基因在魚類發(fā)育過程中的表達
    1.5 本研究目的及意義
第2章 虹鱒Dnd基因克隆及序列特征分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器設備
        2.1.3 主要試劑盒及藥品
        2.1.4 相關(guān)試劑配制
    2.2 引物序列
    2.3 實驗方法
        2.3.1 總RNA提取
        2.3.2 RNA反轉(zhuǎn)為cDNA
        2.3.3 PCR擴增基因cDNA片段
        2.3.4 PCR產(chǎn)物純化及回收
        2.3.5 產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化陽性克隆篩選
        2.3.6 測序
        2.3.7 虹鱒Dnd基因序列分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 虹鱒Dnd基因cDNA克隆
        2.4.2 虹鱒Dnd氨基酸生物信息學分析
        2.4.3 虹鱒Dnd氨基酸序列比對
        2.4.4 系統(tǒng)進化樹分析
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鱒中的表達及定位研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物及采集方法
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 實驗試劑及配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 實時熒光定量PCR
        3.2.2 Western blot
        3.2.3 免疫組織化學切片
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鱒成體各組織中表達分析
        3.3.2 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鱒胚胎發(fā)育階段表達分析
        3.3.3 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鱒各發(fā)育階段性腺中表達分析
        3.3.4 Vasa及 Dnd蛋白在不同倍性雌性虹鱒各發(fā)育階段性腺中的定位研究
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]黑龍江所取得虹鱒全雌三倍體制種工藝核心關(guān)鍵技術(shù)新突破[J].   中國水產(chǎn). 2016(03)
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[8]翹嘴紅鲌Vasa基因cDNA克隆及其組織表達特征[J]. 曹訪,劉莉,采克俊,李景芬.  中國畜牧雜志. 2014(13)
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[3]半滑舌鰨生殖細胞標記基因的克隆、表達及調(diào)控區(qū)功能驗證[D]. 黃進強.中國海洋大學 2014
[4]基于vasa/dnd基因標記的兩種海水魚原始生殖細胞發(fā)生發(fā)育的研究[D]. 林帆.中國科學院研究生院（海洋研究所） 2013
[5]不同倍性虹鱒Oncorhynchus mykiss性腺和配子發(fā)育及血細胞比較研究[D]. 韓英.東北農(nóng)業(yè)大學 2008

碩士論文
[1]牙鲆dead end 基因功能的初步探究[D]. 隋玉嫘.中國科學院研究生院(海洋研究所) 2016
[2]牙鲆原始生殖細胞的標記及其遷移機制的初步研究[D]. 李美潔.中國科學院研究生院(海洋研究所) 2015
[3]中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）生殖相關(guān)基因的克隆及其表達模式研究[D]. 王敏.蘇州大學 2015
[4]尼羅羅非魚dnd和aldhla2基因在生殖細胞發(fā)育過程中的功能研究[D]. 方玲玲.西南大學 2014
[5]牙鲆vasa基因的克隆、表達分析及其啟動子調(diào)控的GFP報告載體構(gòu)建[D]. 吳曉萌.中國海洋大學 2013
[6]稀有鮑鯽dead end基因的克隆及其功能研究[D]. 段俊丹.華中師范大學 2013
[7]二、三和四倍體虹鱒Oncorhynchus mykiss精子生物學研究[D]. 楊翟平.東北農(nóng)業(yè)大學 2012
[8]虹鱒卵巢發(fā)育及相關(guān)系數(shù)研究[D]. 蔡�，�.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2011
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本文編號：3688197