乳酸乳球菌廣泛應用于發(fā)酵乳制品,其中一些菌株具有產(chǎn)胞外多糖（Exopolysaccharides,EPS）的特性。乳酸菌EPS結(jié)構(gòu)多變,生物合成復雜,為了解析新的乳酸菌EPS結(jié)構(gòu)特征,探究其生物合成機制,本論文以分離自錫林郭勒盟嚼口的一株具有產(chǎn)EPS的乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823為研究對象,對其產(chǎn)生的EPS進行分離純化、初級結(jié)構(gòu)解析,完成菌株全基因組測序和菌株不同生長階段eps基因簇轉(zhuǎn)錄分析等。主要研究結(jié)果如下:1.菌株IMAU11823以2%的接種量接種于M17液體培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24 h后粗多糖得率為201.44 mg/L;該粗多糖具有較強的還原能力和DPPH自由基、羥基自由基清除能力,且具有濃度依賴性。利用DEAE-52陰離子交換柱對獲得的粗多糖進行分離純化得到三個組分,分別命名為EPS-1、EPS-2 和 EPS-3。2.進一步對EPS-1和EPS-2的結(jié)構(gòu)特征進行研究,結(jié)果表明EPS-1由甘露糖和葡萄糖組成,摩爾比為1:7.01;EPS-2由甘露糖、鼠李糖和葡萄糖組成,摩爾比為7.45:1:2.34。紅外光譜分析結(jié)果表明,兩者均具有多糖的特征吸收峰,且都含有吡喃糖苷... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 多糖概述
    1.2 乳酸菌胞外多糖概述
        1.2.1 乳酸菌
        1.2.2 乳酸菌胞外多糖
        1.2.3 胞外多糖在食品行業(yè)的應用
        1.2.4 胞外多糖的生物活性
    1.3 胞外多糖結(jié)構(gòu)的鑒定方法
        1.3.1 胞外多糖的分離純化
        1.3.2 胞外多糖初級結(jié)構(gòu)分析方法
    1.4 乳酸菌胞外多糖生物合成及其基因簇
        1.4.1 胞外多糖的生物合成
        1.4.2 乳酸菌的eps基因簇
    1.5 乳酸乳球菌胞外多糖概述
        1.5.1 乳酸乳球菌
        1.5.2 乳酸乳球菌胞外多糖研究進展
        1.5.3 乳酸乳球菌的eps基因簇
    1.6 立題意義與研究內(nèi)容
        1.6.1 立題意義
        1.6.2 研究內(nèi)容
2 實驗材料
    2.1 實驗菌株
    2.2 試劑與儀器
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 儀器與設備
3 實驗方法
    3.1 胞外多糖的結(jié)構(gòu)特征鑒定
        3.1.1 乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823胞外多糖的制備
        3.1.2 粗多糖體外抗氧化特性的測定
        3.1.3 乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823粗多糖的純化
        3.1.4 單糖組成分析
        3.1.5 紅外光譜分析
        3.1.6 核磁共振波譜
    3.2 全基因組測序及eps基因簇鑒定
        3.2.1 菌株培養(yǎng)與基因組DNA的提取
        3.2.2 全基因組測序和組裝
        3.2.3 基因組注釋
        3.2.4 基因組比較分析
        3.2.5 核酸序列登錄號
    3.3 關鍵基因的微滴式數(shù)字PCR定量分析
        3.3.1 RNA的提取
        3.3.2 cDNA的合成
        3.3.3 關鍵基因的微滴式數(shù)字PCR
4 結(jié)果與分析
    4.1 胞外多糖含量及體外抗氧化特性的測定
        4.1.1 胞外多糖含量測定結(jié)果
        4.1.2 粗多糖體外抗氧化活性
    4.2 胞外多糖結(jié)構(gòu)測定與解析
        4.2.1 胞外多糖的分離純化
        4.2.2 胞外多糖的單糖組成
        4.2.3 胞外多糖的紅外光譜分析
        4.2.4 胞外多糖的核磁共振波譜分析
    4.3 乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823全基因組測序及eps基因簇鑒定
        4.3.1 乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823的基因組特征
        4.3.2 乳酸乳球菌乳酸亞種IMAU11823功能注釋
        4.3.3 乳酸乳球菌乳酸亞種基因組的比較分析
        4.3.4 糖代謝相關基因的分析
        4.3.5 胞外多糖生物合成基因簇的鑒定
        4.3.6 關鍵基因表達量的分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]自然發(fā)酵乳制品中乳酸菌的生物多樣性[J]. 張和平.  生命科學. 2015(07)
[2]1株高產(chǎn)EPS嗜熱鏈球菌的篩選及培養(yǎng)條件優(yōu)化[J]. 劉麗波,李春,孟祥晨.  中國食品學報. 2007(03)

博士論文
[1]德氏乳桿菌保加利亞亞種的群體遺傳學和功能基因組學研究[D]. 宋宇琴.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2018

碩士論文
[1]瑞士乳桿菌MB2-1胞外多糖制備、結(jié)構(gòu)和生理功能的研究[D]. 紀鵑.南京農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]馬奶酒樣乳桿菌ZW3（CGMCC2809）WANG1297基因的克隆、表達與功能研究[D]. 西艷雙.天津科技大學 2014



本文編號：3649300