目的肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae）是醫(yī)院感染的常見條件致病性病原體,可引起尿路感染、肺炎、敗血癥、化膿性肝膿腫和腦膜炎等。cAMP受體蛋白（cAMP receptor protein,CRP）是一類負責細菌轉錄調控的重要蛋白。生物信息學分析顯示KP1₀324啟動子區(qū)存在可能與CRP結合的保守序列,KP1₀324基因推測可能參與生物膜的形成。本文探究CRP對KP1₀324基因的調控作用以及KP1₀324基因對生物膜形成的影響。方法首先,對標記的KP1₀324片段和純化的CRP進行體外孵育,通過凝膠遷移實驗（EMSA）分析CRP與KP1₀324基因是否發(fā)生結合。然后,利用DNase I足跡實驗測序尋找二者結合的具體堿基序列,分析其與預測結合序列的位置關系。接下來,LacZ報告基因融合實驗,將構建的placZ15-p0324重組質粒分別轉入CCW01和CCW01-Δcrp,通過檢測β-半乳糖苷酶的活性來反映K... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

EMSA凝膠電泳結果

圖 2 DNase I 足跡實驗結果Fig 2 Results of DNase ICoding：標記正向引物；Non-coding：標記反向引基因融合實驗果證明了CRP與KP1_0324基因能夠直接結合，4 基因產生相互作用，從而調控其在細菌內的表構建了 placZ15-p0324 重組質粒，結果如圖 3.1及 CCW01-Δcrp，分別如圖 3.2 和 3.3 所示；苷酶活性，每株菌測量 3 組數據，利用兩獨立示。在缺失 crp 基因的 CCW01-Δcrp 中，β-半驗證明 crp 基因能夠負調控 KP1_0324 基因啟

圖 3.1 placZ15-p0324 質粒片段電泳圖Fig 3.1 The gel electrophoresis of placZ15-p0324化子為模板，KP1_0324-lacZ-F/R 為引物對擴增得到的 1_0324-lacZ-F/R 為引物對擴增得到的 DNA 片段；3：以 000 DNAMarker。M 1 2 31 000bp2 000bp750bp500bp

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2017年CHINET中國細菌耐藥性監(jiān)測[J]. 胡付品,郭燕,朱德妹,汪復,蔣曉飛,徐英春,張小江,張朝霞,季萍,謝軼,康梅,王傳清,王愛敏,徐元宏,沈繼錄,孫自鏞,陳中舉,倪語星,孫景勇,褚云卓,田素飛,胡志東,李金,俞云松,林潔,單斌,杜艷,郭素芳,魏蓮花,鄒鳳梅,張泓,王春,胡云建,艾效曼,卓超,蘇丹虹,汪瑞忠,房華,俞碧霞,趙勇,龔萍,郭大文,趙金英,劉文恩,李艷明,金炎,邵春紅,溫開鎮(zhèn),張貽榮,徐雪松,鄢超,喻華,黃湘寧,王山梅,楚亞菲,張利俠,馬娟,周樹平,周艷,朱鐳,孟晉華,董芳,鄭紅艷,沈瀚,周萬青,賈偉,李剛,吳勁松,盧月梅.  中國感染與化療雜志. 2018(03)
[2]血流感染高致病性肺炎克雷伯菌毒力因子及分子分型特點分析[J]. 林佛君,胥志超,林志偉,鄭金鑫,陳重,程航,徐廣健,韓雪瑩,張波,余治健,鄧啟文.  中國病原生物學雜志. 2018(04)

碩士論文
[1]肺炎克雷伯菌CRP突變株的構建及其生物膜表型分析[D]. 高鈺雙.重慶醫(yī)科大學 2014
[2]cAMP受體蛋白調控肺炎克雷伯菌kfuABC操縱子的研究[D]. 楊世亞.重慶醫(yī)科大學 2014



本文編號：3615989