目的對具有良好抗菌性的千里光進行pal基因克隆,進行序列結(jié)構(gòu)與系統(tǒng)進化分析,揭示該酶生物學功能與進化地位。方法以千里光轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中分離得到pal基因核酸序列設計引物,PCR擴增全長驗證,運用SignalP、MEGA等系列生物信息學軟件進行核酸序列信息、氨基酸結(jié)構(gòu)特征與系統(tǒng)進化分析。結(jié)果克隆獲得長度為2 159 bp的核酸序列,ORF分析表明該基因編碼708個氨基酸,無信號肽,是非跨膜蛋白。與近緣物種pal基因blast分析表明其氨基酸序列與黑心菊、雪蓮等相似度達92.22%,具有相同的活性位點和保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進化樹分析表明,千里光與菊科植物青蒿、雪蓮歸于一個亞支,表明3種植物pal在進化上具有較近的親緣關(guān)系。結(jié)論千里光pal基因序列結(jié)構(gòu)與其他14種PAL酶家族成員相似度高,在進化上與菊科植物較近。 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學學報. 2020,43(03)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

pal基因PCR擴增檢測

以黑心菊、雪蓮、紫莖澤蘭與千里光進行苯丙氨酸解氨酶的氨基酸序列比對,結(jié)果表明4個物種的氨基酸序列高度相似(92.22%),其中內(nèi)部序列上相似度高,但N端存在較大差異,是序列間長度差異形成的主要區(qū)域。同時,InterPro在線分析發(fā)現(xiàn),千里光苯丙氨酸解氨酶具有保守結(jié)構(gòu)域phe_am_lyase(TIGR01226,氨基酸位點:16-697),屬于Lyase class I_like 超基因家族成員,其活性位點(GTITASGDLVPLSYIAG,189～206)與黑心菊和雪蓮相同,僅與紫莖澤蘭有1個位點差異(見圖2)。圖3 15個不同物種PAL系統(tǒng)進化與保守結(jié)構(gòu)域分析

15個不同物種PAL系統(tǒng)進化與保守結(jié)構(gòu)域分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]白及苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、序列特征及激素響應表達分析[J]. 羅才林,李林,陳立,鄧琴,張俊,馬璇,徐德林,錢剛.  中草藥. 2019(03)
[2]大豆異黃酮合成途徑相關(guān)基因差異表達分析[J]. 崔艷偉,李文龍,常文鎖,李喜煥,張彩英.  植物遺傳資源學報. 2016(04)
[3]千里光化學成分和藥理作用研究進展[J]. 徐定平,周鑫堂,郜紅利,吳晶晶.  中國藥師. 2014(09)
[4]千里光抗菌作用的數(shù)量性狀分析[J]. 錢剛,敖弟書,段鵬敏,蔣思思,李有.  武漢植物學研究. 2010(01)
[5]千里光對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌生物合成的影響[J]. 張文平,劉志春,張文書,李小花,黃真,張瑞其.  廣東醫(yī)學. 2009(11)
[6]植物體內(nèi)的黃酮類化合物代謝及其調(diào)控研究進展[J]. 諸姮,胡宏友,盧昌義,李雄.  廈門大學學報(自然科學版). 2007(S1)
[7]苯丙氨酸解氨酶的研究進展[J]. 賀立紅,張進標,賓金華.  食品科技. 2006(07)

碩士論文
[1]利用SmPAL1基因調(diào)控丹參中丹酚酸合成[D]. 邱鏡仁.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]石斛苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及表達分析[D]. 姚瑤.安徽農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：3615713