薄殼山核桃（Carya illinoensis）又稱長山核桃、美國山核桃,為世界著名的經(jīng)濟(jì)干果樹種,其果實(shí)營養(yǎng)豐富,保健價值高。研究發(fā)現(xiàn),長期食用美國山核桃有明顯的防衰老、健腸胃、防治心臟病、心血管疾病等作用。然而,薄殼山核桃樹體高大,不利于人工采摘果實(shí)及日常的養(yǎng)護(hù)管理,培育矮化砧木可為薄殼山核桃育種工作及果品的推廣提供便利。赤霉素（Gibberellins,GAs）是調(diào)控植物株高的重要激素,與之生物合成與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的克隆與分子機(jī)制研究對于合理調(diào)控植物生長發(fā)育和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有極其重要的利用價值。本論文對薄殼山核桃進(jìn)行100 mg L-1的赤霉素噴施處理,通過實(shí)時熒光定量檢測在不同時期（0d、7d、14d、21d、28d）CiGA20ox、CiGA3ox和 CiGA2ox 的相對表達(dá)量以及0d和28d三個基因的空間表達(dá)量,以初步了解CiGA20ox、CiGA3ox和CiGA2ox對赤霉素的響應(yīng)規(guī)律;通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將目的赤霉素矮化基因轉(zhuǎn)入薄殼山核桃體胚內(nèi),后脫菌增值培養(yǎng),最后進(jìn)行干燥萌發(fā),以獲得薄殼山核桃矮化植株。主要研究結(jié)果如下:1、外施赤霉素四周后,薄殼山核桃節(jié)間長度和主根伸長量與對... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１赤霉素合成代謝示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ?ａｎａｂｏｌｉｓｍ??

）上分別搜??索己報道的植物Ｇ．４２０〇ｊｃ、（Ｌ４３〇ｊｃ、Ｇ４２〇；ｒ同源基因的氨基酸序列，通過軟件??ＤＮＡＭＡＮ進(jìn)行氨基酸序列比對。利用ＩＴ０Ｌ?（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｔｏｌ．ｅｍｂｌ．ｄｅ／）和ＭＥＧＡ制作系??統(tǒng)進(jìn)化樹。??２．?２．?２．?３赤霉素相關(guān)基因的時空表達(dá)分析??對處理后Ｏｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ和２８ｄ植株的葉片進(jìn)行采樣，用于基因不同時間??表達(dá)變化；基因不同空間表達(dá)變化采處理后〇ｄ和２８ｄ植株的頂芽、葉①、莖①、葉??②、莖②、葉③、莖③、葉④、莖⑤和根（圖２．１）。樣品采集后立即放入液氮，總??ＲＮＡ的提取方法參照如下。用Ｐｒｉｍｅ?ＳｃｒｉｐｔＴＭ?ＲＴ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ反轉(zhuǎn)錄合成ｃＤＮＡ。??圖２．１薄殼山核桃不同組織部位示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｉｎ?Ｃａｒｙａ?ｉｌｌｉｎｏｅｎｓｉｓ??注：頂芽至第？葉間為莖①，第二葉至第三葉為莖②，依此類推。??１２??

?基于赤霉素矮化基因誘導(dǎo)的薄殼山核桃砧木的培育???３薄殼山核桃Ｃ／Ｇ＞Ａ２０ｏｘ和Ｃ／Ｇ／＼２ｏｘ在薄殼山核桃體胚內(nèi)的遺傳??轉(zhuǎn)化??３．１實(shí)驗材料??３．?１．?１植物材料??選取生長正常、結(jié)構(gòu)完整的薄殼山核桃體胚，如圖３．１－Ｂ，可以用來做轉(zhuǎn)化；而??薄殼山核桃成熟胚如圖３．１－Ｃ，可用來做干燥萌發(fā)，圖３．１－Ａ可用來繼續(xù)增殖。??圖３．１不同時期的薄殼山核桃體胚比例尺：ｌｃｍ??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?ｓｏｍａｔｉｃ?ｅｍｂｒｙｏｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐｅｒｉｏｄｓ?Ｂａｒ：?１ｃｍ??注：Ａ為薄殼山核桃幼胚；Ｂ為薄殼山核桃成熟胚（前期）；Ｃ為薄殼山核桃成熟胚（后期）??３．?１．?２實(shí)驗儀器??高速冷凍離心機(jī)：３Ｋ３Ｄ型，Ｓｉｇｍａ公司，德國；??高壓滅菌鍋：ＳＳ－３２５型，ＴＯＭＹＫＯＧＯＹＯ公司，日本；??光電分析天平：ＴＧ３２８Ａ型，天平儀器廠（上海），中國；??超低溫冰箱：ＤＷ－ＹＬ型，中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司，中國；??ＰＣＲ擴(kuò)增儀：ＧｅｎｅＭａｔｅ，杭州晶格科學(xué)儀器有限公司，中國；??電泳儀：ＤＹＹ－１２型，北京市六一儀器廠，中國；??凝膠成像系統(tǒng)：〇６丨０〇〇＼１＾＋型８１０－１＾０公司，美國；??紫外可見分光光度計：ＵＶ７５５Ｂ型，上海分析儀器總廠，中國；??３Ｈｅ通風(fēng)櫥、超凈工作臺，ＡＩＲＴＥＣＨ公司；??電熱恒溫水槽：ＤＫ－８Ｄ型，上海一恒科技有限公司，中國??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]核桃JrGA2ox基因的克隆、亞細(xì)胞定位及功能驗證[J]. 張佳琦,胡恒康,徐川梅,胡淵淵,黃有軍,夏國華,黃堅欽,常英英,葉磊,婁和強(qiáng),張啟香.  林業(yè)科學(xué). 2019(02)
[2]毛竹莖稈伸長過程中赤霉素生物合成、降解和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)鍵基因的鑒定及表達(dá)分析[J]. 葉家其,張毓婷,傅鷹,周明兵,湯定欽.  生物工程學(xué)報. 2019(04)
[3]蘋果赤霉素氧化酶基因GA2ox、GA3ox和GA20ox家族全基因組鑒定及表達(dá)分析[J]. 董鳳,樊勝,馬小龍,孟媛,左希亞,劉小杰,李珂,劉楨,韓明玉,張東.  園藝學(xué)報. 2018(04)
[4]楊樹PsnGA20ox1過表達(dá)對煙草葉片發(fā)育的影響[J]. 劉露露,魯婷婷,王爽,李美靚,趙雙菁,劉瑩瑩,魏志剛.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(02)
[5]高等植物赤霉素3-β-雙氧化酶基因研究進(jìn)展[J]. 楊意宏,徐浩,陳段芬,高志民.  生物技術(shù)通報. 2018(03)
[6]荔波連蕊茶GA2ox1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 肖政,李紀(jì)元,范正琪,李辛雷,殷恒福.  林業(yè)科學(xué)研究. 2016(01)
[7]矮生山茶‘恨天高’GA20ox1的克隆及其對轉(zhuǎn)基因煙草株形的影響[J]. 王江英,吳斌,劉偉鑫,范正琪,李紀(jì)元.  園藝學(xué)報. 2015(08)
[8]美國山核桃矮化砧的篩選[J]. 勒棟梁,李永榮,彭方仁,王克春,何海洋,李小飛.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(04)
[9]Rht12矮稈小麥GA3ox基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 劉穎,陽文龍,郭小麗,翟曉,劉冬成,孫家柱,夏石頭,張愛民.  分子植物育種. 2015(02)
[10]植物矮化突變體的來源及矮化機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 白麗君,尹淑霞.  生物技術(shù)通報. 2014(06)

博士論文
[1]通過沉默GA20-ox基因獲矮化蘋果植株的研究[D]. 趙愷.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]外源赤霉素和多效唑?qū)μ夜?jié)間長度及赤霉素代謝基因表達(dá)影響[D]. 郝鵬博.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]枇杷赤霉素代謝途徑關(guān)鍵酶基因的克隆及表達(dá)初步分析[D]. 李華.西南大學(xué) 2017
[3]薄殼山核桃遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建[D]. 糜瑤琦.浙江農(nóng)林大學(xué) 2017
[4]黃瓜赤霉素氧化酶基因GA20ox、GA2ox、GA3ox的生物信息學(xué)及GA20ox1功能分析[D]. 王增輝.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]小黑楊PnsGA20ox1基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 張凱旋.東北林業(yè)大學(xué) 2011
[6]山核桃果實(shí)成熟期間基因表達(dá)的初步分析[D]. 周秦.浙江農(nóng)林大學(xué) 2010
[7]三種山核桃屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究[D]. 紀(jì)小楠.中南林業(yè)科技大學(xué) 2009



本文編號：3592084