玉米（Zea mays L.）不僅是世界上總產(chǎn)量最高的農(nóng)作物,也是我國重要的糧食作物之一�；蚬こ逃N技術的應用為改良和培育玉米新種質(zhì)提供了新的途徑,但常規(guī)的基因工程手段會引起人們對轉基因食品安全性的爭議。因此,利用外源基因清除系統(tǒng)“gene deletor”創(chuàng)制和培育安全的轉基因玉米具有重要理論和實踐意義。本研究以構建的含有新重組位點LoxP/FRT植物表達載體I和含有玉米花粉種子特異啟動子P_MADS35-FLP驅(qū)動重組酶FLP植物表達表達載體II分別對玉米品種T32與QB506進行遺傳轉化并篩選獲得轉基因植株,以實現(xiàn)利用雜交誘導的方式驅(qū)動外源基因清除,并最終為篩選和培育不含外源篩選報告基因安全轉基因玉米新種質(zhì)奠定基礎,并且達到將外源基因在有性繁殖的制種過程中可以保存,而商品化的種子種植后收獲的供給人類和動物食用的種子內(nèi)則不含有任何外源基因的目的。本研究通過兩種轉基因植株雜交玉米F1代分析在玉米中基因刪除原件的刪除效果,主要獲得以下結果:1、構建含有新重組位點LoxP/FRT植物表達載體I與含有特異啟動子P_MADS35-FLP驅(qū)動重組酶FL... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Cre/LoxP重組系統(tǒng)重組過程示意圖

圖 1-3 FLP 重組酶識別位點（FRT）Figure 1-3 FLP recognition sites（FRT）FLP/FRT 特異性位點重組酶刪除系統(tǒng)的重組原理與 Cre/LoxP 系統(tǒng)相似，其主要的刪除方式也基本相同。Lyznik（1993）等首先將 FLP/FRT 特異性位點重組酶刪除系統(tǒng)運用在水稻與玉米的轉基因中，Lyznik 構建了一個特殊植物表達載體，其啟動子與編碼序列間有一段長達 1.31kb 的序列，這樣就使得啟動子不能特異性啟動編碼序列，并且在這段 1.31kb 序列兩端加了一段同向重復的 FRT 特異性序列，這樣當重組酶 FLP 結合 FRT 序列后，可以特異性刪除 1.31 kp 的序列，使其 Gus 報告基因得到表達。另外有報道承 FRT 序列的長度也對LP/FRT 特異性位點重組酶刪除系統(tǒng)的刪除效率有影響，當其為 48bp 時 US 基因的陽性對照為 25 %-50 %，當其序列為 37 bp 時，其時 US 基因的陽性對照為 60 %-90 %，說明其序列為37bp 其刪除效率會更高。Davis 和 Lloyd 在 1994 年利用 FLP/FRT 特異性位點重組酶刪除系統(tǒng)遺傳轉化煙草驗證了該系統(tǒng)的刪除效果，他們將潮霉素抗性基因 hpt 兩側加上相同方向的FRT 特異性序列，利用 FLP 重組酶進行特異性結合重組，結果證實 FLP/FRT 特異性位點重

的外源基因并且可以使其刪除效率達到 100%；（2）該系統(tǒng)加快了重組刪除的周期，避免了兩次雜交的繁瑣步驟；（3）該系統(tǒng)的應用會更加的廣泛包括在生物反應器中的應用。圖1-4 “外源基因清除（Gene-Deletor）”技術原理（Luo et al., 2007）Figure1-8 The principle of the Gene-Deletor technology利用基因工程技術培育了大量轉基因作物新種質(zhì)或品種，21世紀以來以轉betA的玉米植株的耐鹽性具有明顯提高(楊愛芳等，2007)，將cry1Ac-M、epsps、GAT、ZmPIS基因一同轉入玉米，賦予了植株抗玉米螟、抗除草劑草甘膦特性，提高了植株的抗旱性(孫越等, 2014)，自1996 年，轉Bt基因玉米在美國首次商業(yè)化種植，至今已有11 個國家大面積種植。2011 年

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]土壤宏基因組文庫篩選除草劑降解基因[D]. 路楊.吉林大學 2011

碩士論文
[1]抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的轉基因復合性狀玉米種質(zhì)的創(chuàng)制[D]. 孫越.山東大學 2014
[2]利用三種受體系統(tǒng)獲得抗除草劑轉基因玉米[D]. 王守云.吉林農(nóng)業(yè)大學 2013
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本文編號：3559020