玉米（Zea mays L.）不僅是世界上總產(chǎn)量最高的農(nóng)作物,也是我國(guó)重要的糧食作物之一�；蚬こ逃N技術(shù)的應(yīng)用為改良和培育玉米新種質(zhì)提供了新的途徑,但常規(guī)的基因工程手段會(huì)引起人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的爭(zhēng)議。因此,利用外源基因清除系統(tǒng)“gene deletor”創(chuàng)制和培育安全的轉(zhuǎn)基因玉米具有重要理論和實(shí)踐意義。本研究以構(gòu)建的含有新重組位點(diǎn)LoxP/FRT植物表達(dá)載體I和含有玉米花粉種子特異啟動(dòng)子P_MADS35-FLP驅(qū)動(dòng)重組酶FLP植物表達(dá)表達(dá)載體II分別對(duì)玉米品種T32與QB506進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化并篩選獲得轉(zhuǎn)基因植株,以實(shí)現(xiàn)利用雜交誘導(dǎo)的方式驅(qū)動(dòng)外源基因清除,并最終為篩選和培育不含外源篩選報(bào)告基因安全轉(zhuǎn)基因玉米新種質(zhì)奠定基礎(chǔ),并且達(dá)到將外源基因在有性繁殖的制種過程中可以保存,而商品化的種子種植后收獲的供給人類和動(dòng)物食用的種子內(nèi)則不含有任何外源基因的目的。本研究通過兩種轉(zhuǎn)基因植株雜交玉米F1代分析在玉米中基因刪除原件的刪除效果,主要獲得以下結(jié)果:1、構(gòu)建含有新重組位點(diǎn)LoxP/FRT植物表達(dá)載體I與含有特異啟動(dòng)子P_MADS35-FLP驅(qū)動(dòng)重組酶FL... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Cre/LoxP重組系統(tǒng)重組過程示意圖

圖 1-3 FLP 重組酶識(shí)別位點(diǎn)（FRT）Figure 1-3 FLP recognition sites（FRT）FLP/FRT 特異性位點(diǎn)重組酶刪除系統(tǒng)的重組原理與 Cre/LoxP 系統(tǒng)相似，其主要的刪除方式也基本相同。Lyznik（1993）等首先將 FLP/FRT 特異性位點(diǎn)重組酶刪除系統(tǒng)運(yùn)用在水稻與玉米的轉(zhuǎn)基因中，Lyznik 構(gòu)建了一個(gè)特殊植物表達(dá)載體，其啟動(dòng)子與編碼序列間有一段長(zhǎng)達(dá) 1.31kb 的序列，這樣就使得啟動(dòng)子不能特異性啟動(dòng)編碼序列，并且在這段 1.31kb 序列兩端加了一段同向重復(fù)的 FRT 特異性序列，這樣當(dāng)重組酶 FLP 結(jié)合 FRT 序列后，可以特異性刪除 1.31 kp 的序列，使其 Gus 報(bào)告基因得到表達(dá)。另外有報(bào)道承 FRT 序列的長(zhǎng)度也對(duì)LP/FRT 特異性位點(diǎn)重組酶刪除系統(tǒng)的刪除效率有影響，當(dāng)其為 48bp 時(shí) US 基因的陽(yáng)性對(duì)照為 25 %-50 %，當(dāng)其序列為 37 bp 時(shí)，其時(shí) US 基因的陽(yáng)性對(duì)照為 60 %-90 %，說明其序列為37bp 其刪除效率會(huì)更高。Davis 和 Lloyd 在 1994 年利用 FLP/FRT 特異性位點(diǎn)重組酶刪除系統(tǒng)遺傳轉(zhuǎn)化煙草驗(yàn)證了該系統(tǒng)的刪除效果，他們將潮霉素抗性基因 hpt 兩側(cè)加上相同方向的FRT 特異性序列，利用 FLP 重組酶進(jìn)行特異性結(jié)合重組，結(jié)果證實(shí) FLP/FRT 特異性位點(diǎn)重

的外源基因并且可以使其刪除效率達(dá)到 100%；（2）該系統(tǒng)加快了重組刪除的周期，避免了兩次雜交的繁瑣步驟；（3）該系統(tǒng)的應(yīng)用會(huì)更加的廣泛包括在生物反應(yīng)器中的應(yīng)用。圖1-4 “外源基因清除（Gene-Deletor）”技術(shù)原理（Luo et al., 2007）Figure1-8 The principle of the Gene-Deletor technology利用基因工程技術(shù)培育了大量轉(zhuǎn)基因作物新種質(zhì)或品種，21世紀(jì)以來以轉(zhuǎn)betA的玉米植株的耐鹽性具有明顯提高(楊愛芳等，2007)，將cry1Ac-M、epsps、GAT、ZmPIS基因一同轉(zhuǎn)入玉米，賦予了植株抗玉米螟、抗除草劑草甘膦特性，提高了植株的抗旱性(孫越等, 2014)，自1996 年，轉(zhuǎn)Bt基因玉米在美國(guó)首次商業(yè)化種植，至今已有11 個(gè)國(guó)家大面積種植。2011 年

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]土壤宏基因組文庫(kù)篩選除草劑降解基因[D]. 路楊.吉林大學(xué) 2011

碩士論文
[1]抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的轉(zhuǎn)基因復(fù)合性狀玉米種質(zhì)的創(chuàng)制[D]. 孫越.山東大學(xué) 2014
[2]利用三種受體系統(tǒng)獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米[D]. 王守云.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]玉米抗旱性與主要農(nóng)藝性狀的QTL及遺傳多樣性分析[D]. 吳建偉.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3559020