中間錦雞兒分布于干旱和半干旱地區(qū),適應(yīng)干旱和高溫逆境環(huán)境,被廣泛應(yīng)用于固沙,水土保持,具有很高的生態(tài)價(jià)值,是研究抗逆基因的理想材料。NAC轉(zhuǎn)錄因子具有參與逆境脅迫應(yīng)答的功能,本研究通過(guò)PCR擴(kuò)增技術(shù)克隆CiNAC036與AtNAC036兩個(gè)NAC基因,并對(duì)其轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行干旱、鹽以及甘露醇等逆境脅迫處理,探究分析其基因功能。具體的研究結(jié)果如下:1.于中間錦雞兒干旱轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中得到一條注釋為NAC基因序列,通過(guò)NCBI中的Blast進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)該基因具有完整的開(kāi)放閱讀框（ORF）,且其蛋白序列與擬南芥NAC036一致性達(dá)到74%,因此將該基因命名為CiNA C036。2.克隆CiNA C036基因,基因大小為909bp,編碼302個(gè)氨基酸,其蛋白具有完整的NAC結(jié)構(gòu)域,同時(shí)克隆AtNAC036基因,基因大小為831 bp,編碼276個(gè)氨基酸。3.對(duì)CiNA C036基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行干旱、鹽以及甘露醇等非生物脅迫處理,發(fā)現(xiàn)只有在甘露醇處理后出現(xiàn)響應(yīng)非生物脅迫的表型,對(duì)于干旱和鹽處理,轉(zhuǎn)基因擬南芥未表現(xiàn)出響應(yīng)非生物脅迫的表型。同時(shí)對(duì)其同源擬南芥AtNAC036基因進(jìn)行甘露醇處理,... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＮＡＣ轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮＡＣ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒｓ??

，中間錦雞兒具有良好的再生能力，即使遭受到昆蟲(chóng)及牲畜的啃??食，也能夠在較短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖??中間錦雞兒對(duì)環(huán)境適應(yīng)性的增強(qiáng)增加了中間錦雞兒自身的生態(tài)價(jià)值和飼草??價(jià)值。人們對(duì)中間錦雞兒抗逆機(jī)制的研究越來(lái)越重視，所報(bào)道的抗逆轉(zhuǎn)錄因子也??隨之增多，例如：ＮＡＣ轉(zhuǎn)錄因子［３７‘?１＿］、ＷＲＫＹ轉(zhuǎn)錄因子Ｍ??ＭＹＢ（ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ）轉(zhuǎn)錄因子［１２ｔＭ２５］和?ｂＨＬＨ（ｂａｓｉｃ?Ｈｅｌｉｘ－Ｌｏｏｐ－?Ｈｅｌｉｘ）轉(zhuǎn)錄因子［１２６＿??１３０］等??Ａ：?｜??圖３中間錦雞兒的圖片??Ｆｉｇ．?３?Ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｒａｇａｎａ?ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ??１．２．２中間錦雞兒非生物脅迫耐受性的研究進(jìn)展??中間錦雞兒作為研宄植物抗逆機(jī)制的理想材料ｍ°］，其抗逆基因的挖掘也隨??之增多。例如：在中間錦雞兒中，毛銘銖等人發(fā)現(xiàn)ａ奶？ａｔｍ轉(zhuǎn)基因擬南芥在經(jīng)??過(guò)干旱處理后，轉(zhuǎn)基因擬南芥株系較野生型相比出現(xiàn)更易萎蔫的現(xiàn)象，檢測(cè)處理??后的株系的丙二醛含量得知轉(zhuǎn)基因株系的丙二醛含量高于野生型，所以通過(guò)此研??宄他們得出ａ奶認(rèn)Ｆ６基因能降低轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)干旱脅迫的耐受性［１３Ｓ轉(zhuǎn)??況基因擬南芥減弱了植株對(duì)干旱脅迫的耐受能力，但卻增強(qiáng)了植株對(duì)??ＡＢＡ的耐受能力［１Ｗ；轉(zhuǎn)０＿｝７５基因擬南芥減弱了植株對(duì)鹽的耐受能力，同??時(shí)增強(qiáng)了?ＡＢＡ對(duì)種子萌發(fā)期間抑制作用［１３２］；劉坤等人發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)ａＤ應(yīng)；Ｃ基因擬??南芥在經(jīng)過(guò)甘露醇處理后，其丙二醛的含量顯著較野生型低，葉綠素含量顯著較??野生型髙，轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)出明顯的耐旱表型［１３３］；岳文冉、于秀敏等人發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)??ａ＿ＰＣ／Ｂ２２基因擬南芥在經(jīng)過(guò)鹽、ＡＢＡ以及甘露醇的

２０?中間錦雞兒及其擬南芥同源基因的功能分析???３結(jié)果與分析??３．１?及其擬南芥同源基因的克隆??３．１．１中間錦雞兒０＾６基因的克隆??于中間錦雞兒干旱轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中得到一條注釋為ＭＣ基因序列，通過(guò)??ＮＣＢＩ中的Ｂｌａｓｔ進(jìn)行比對(duì)分析后，發(fā)現(xiàn)該基因具有完整的開(kāi)放閱讀框（ＯＲＦ），且??其蛋白序列與擬南芥ＮＡＣ０３６?—致性達(dá)到５８．０２％，因此將該基因命名為??ａＭ４Ｃ０３（５。利用?Ｐｒｉｍｅｒ?５．０?軟件設(shè)計(jì)特異性引物?ＣｉＮＡＣ０３６－Ｆ（ＨＡ）與?ＣｉＮＡＣ０３６－??Ｒ（ＨＡ），以中間錦雞兒的ｃＤＮＡ作為模板對(duì)ａＡ＾ＯＵ（５基因的進(jìn)行克隆，結(jié)果如??圖５所示，其條帶大小為９０９?ｂｐ，編碼３０２個(gè)氨基酸。??ｍ?■??ｉ〇〇〇ｂｐ＾—??７５０ｂｐ??■ｌ??圖５中間錦雞兒ＯＡ＾ａＷ（５基因ｃＤＮＡ的克隆??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｃＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣｉＮＡＣ０３６?ｆｒｏｍ?Ｃ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ??注：圖中１、２均代表同一?ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；Ｍ：?ＤＬ?２０００?ｂｐ?ＤＮＡｍａｒｋｅｒ??３．１．２同源擬南芥基因的克隆??為了進(jìn)一步確定基因的功能不是由于其在擬南芥中異源表達(dá)導(dǎo)致的，我們從??Ｔａｉｒ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ｏｒｇ／）中查找得到?ＣＶｉＶ／４Ｃ０３（５?的同源基因?的??序列，利用Ｐｒｉｍｅｒ?５．０軟件設(shè)計(jì)特異性引物ＡｔＮＡＣ０３６－Ｆ（ＨＡ）與ＡｔＮＡＣ０３６－Ｒ（ＨＡ），??以擬南芥野生型（Ｃｏｌ－Ｏ）ｃＤＮＡ為模板對(duì)基因進(jìn)行克隆，結(jié)果如圖６所??示，其條帶大小為８３１?ｂｐ，編碼２７６個(gè)氨基酸。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[5]水稻ONAC家族基因重疊表達(dá)特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D]. 孫利軍.浙江大學(xué) 2012
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[7]大豆MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及其表達(dá)研究[D]. 楊文杰.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]中間錦雞兒CiCPK32基因的克隆與功能分析[D]. 牛俊美.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]中間錦雞兒3個(gè)DUF基因的生物信息學(xué)分析和CiDUF966-1基因功能分析[D]. 楊天瑞.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]中間錦雞兒參與葉片衰老基因CibHLH027的克隆和功能研究[D]. 李娜.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[5]植物L(fēng)EA基因家族的分子進(jìn)化研究和一擬南芥非典型LEA基因功能的初步分析[D]. 李翔.江蘇大學(xué) 2016
[6]中間錦雞兒干旱脅迫下的葉片全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)構(gòu)建[D]. 吳葉寧.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[7]大豆誘導(dǎo)型NAC轉(zhuǎn)錄因子基因啟動(dòng)子克隆及功能研究[D]. 楊丹.山東大學(xué) 2015
[8]亞洲棉NAC轉(zhuǎn)錄因子家族的生物信息學(xué)分析及相關(guān)NAC基因的克隆和功能研究[D]. 王中娜.西南大學(xué) 2015
[9]擬南芥LEA7基因功能的研究[D]. 孫娜娜.河南大學(xué) 2013
[10]玉米WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子基因ZmWRKY33的克隆及功能分析[D]. 黎華.揚(yáng)州大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3517305