發(fā)布時間：2021-11-25 03:24

　　中間錦雞兒分布于干旱和半干旱地區(qū),適應干旱和高溫逆境環(huán)境,被廣泛應用于固沙,水土保持,具有很高的生態(tài)價值,是研究抗逆基因的理想材料。NAC轉錄因子具有參與逆境脅迫應答的功能,本研究通過PCR擴增技術克隆CiNAC036與AtNAC036兩個NAC基因,并對其轉基因擬南芥進行干旱、鹽以及甘露醇等逆境脅迫處理,探究分析其基因功能。具體的研究結果如下:1.于中間錦雞兒干旱轉錄組數(shù)據(jù)庫中得到一條注釋為NAC基因序列,通過NCBI中的Blast進行比對,發(fā)現(xiàn)該基因具有完整的開放閱讀框（ORF）,且其蛋白序列與擬南芥NAC036一致性達到74%,因此將該基因命名為CiNA C036。2.克隆CiNA C036基因,基因大小為909bp,編碼302個氨基酸,其蛋白具有完整的NAC結構域,同時克隆AtNAC036基因,基因大小為831 bp,編碼276個氨基酸。3.對CiNA C036基因的轉基因擬南芥進行干旱、鹽以及甘露醇等非生物脅迫處理,發(fā)現(xiàn)只有在甘露醇處理后出現(xiàn)響應非生物脅迫的表型,對于干旱和鹽處理,轉基因擬南芥未表現(xiàn)出響應非生物脅迫的表型。同時對其同源擬南芥AtNAC036基因進行甘露醇處理,... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＮＡＣ轉錄因子的結構??Ｆｉｇ．?１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮＡＣ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒｓ??

，中間錦雞兒具有良好的再生能力，即使遭受到昆蟲及牲畜的啃??食，也能夠在較短的時間內(nèi)進行生長繁殖??中間錦雞兒對環(huán)境適應性的增強增加了中間錦雞兒自身的生態(tài)價值和飼草??價值。人們對中間錦雞兒抗逆機制的研究越來越重視，所報道的抗逆轉錄因子也??隨之增多，例如：ＮＡＣ轉錄因子［３７‘?１＿］、ＷＲＫＹ轉錄因子Ｍ??ＭＹＢ（ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ）轉錄因子［１２ｔＭ２５］和?ｂＨＬＨ（ｂａｓｉｃ?Ｈｅｌｉｘ－Ｌｏｏｐ－?Ｈｅｌｉｘ）轉錄因子［１２６＿??１３０］等??Ａ：?｜??圖３中間錦雞兒的圖片??Ｆｉｇ．?３?Ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｒａｇａｎａ?ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ??１．２．２中間錦雞兒非生物脅迫耐受性的研究進展??中間錦雞兒作為研宄植物抗逆機制的理想材料ｍ°］，其抗逆基因的挖掘也隨??之增多。例如：在中間錦雞兒中，毛銘銖等人發(fā)現(xiàn)ａ奶？ａｔｍ轉基因擬南芥在經(jīng)??過干旱處理后，轉基因擬南芥株系較野生型相比出現(xiàn)更易萎蔫的現(xiàn)象，檢測處理??后的株系的丙二醛含量得知轉基因株系的丙二醛含量高于野生型，所以通過此研??宄他們得出ａ奶認Ｆ６基因能降低轉基因擬南芥對干旱脅迫的耐受性［１３Ｓ轉??況基因擬南芥減弱了植株對干旱脅迫的耐受能力，但卻增強了植株對??ＡＢＡ的耐受能力［１Ｗ；轉０＿｝７５基因擬南芥減弱了植株對鹽的耐受能力，同??時增強了?ＡＢＡ對種子萌發(fā)期間抑制作用［１３２］；劉坤等人發(fā)現(xiàn)轉ａＤ應；Ｃ基因擬??南芥在經(jīng)過甘露醇處理后，其丙二醛的含量顯著較野生型低，葉綠素含量顯著較??野生型髙，轉基因株系表現(xiàn)出明顯的耐旱表型［１３３］；岳文冉、于秀敏等人發(fā)現(xiàn)轉??ａ＿ＰＣ／Ｂ２２基因擬南芥在經(jīng)過鹽、ＡＢＡ以及甘露醇的

２０?中間錦雞兒及其擬南芥同源基因的功能分析???３結果與分析??３．１?及其擬南芥同源基因的克隆??３．１．１中間錦雞兒０＾６基因的克隆??于中間錦雞兒干旱轉錄組數(shù)據(jù)庫中得到一條注釋為ＭＣ基因序列，通過??ＮＣＢＩ中的Ｂｌａｓｔ進行比對分析后，發(fā)現(xiàn)該基因具有完整的開放閱讀框（ＯＲＦ），且??其蛋白序列與擬南芥ＮＡＣ０３６?—致性達到５８．０２％，因此將該基因命名為??ａＭ４Ｃ０３（５。利用?Ｐｒｉｍｅｒ?５．０?軟件設計特異性引物?ＣｉＮＡＣ０３６－Ｆ（ＨＡ）與?ＣｉＮＡＣ０３６－??Ｒ（ＨＡ），以中間錦雞兒的ｃＤＮＡ作為模板對ａＡ＾ＯＵ（５基因的進行克隆，結果如??圖５所示，其條帶大小為９０９?ｂｐ，編碼３０２個氨基酸。??ｍ?■??ｉ〇〇〇ｂｐ＾—??７５０ｂｐ??■ｌ??圖５中間錦雞兒ＯＡ＾ａＷ（５基因ｃＤＮＡ的克隆??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｃＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣｉＮＡＣ０３６?ｆｒｏｍ?Ｃ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ??注：圖中１、２均代表同一?ＰＣＲ擴增產(chǎn)物；Ｍ：?ＤＬ?２０００?ｂｐ?ＤＮＡｍａｒｋｅｒ??３．１．２同源擬南芥基因的克隆??為了進一步確定基因的功能不是由于其在擬南芥中異源表達導致的，我們從??Ｔａｉｒ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ｏｒｇ／）中查找得到?ＣＶｉＶ／４Ｃ０３（５?的同源基因?的??序列，利用Ｐｒｉｍｅｒ?５．０軟件設計特異性引物ＡｔＮＡＣ０３６－Ｆ（ＨＡ）與ＡｔＮＡＣ０３６－Ｒ（ＨＡ），??以擬南芥野生型（Ｃｏｌ－Ｏ）ｃＤＮＡ為模板對基因進行克隆，結果如圖６所??示，其條帶大小為８３１?ｂｐ，編碼２７６個氨基酸。??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3517305