環(huán)境雌激素（Environmental estrogens,EEs）是一種具有雌激素效應(yīng),在生物體內(nèi)模擬雌激素,并通過相應(yīng)受體介導(dǎo)而對生物體基因轉(zhuǎn)錄造成影響的一類化合物。雌激素受體（Estrogen receptor）與雄激素受體（Andorgen receptor）是核受體超家族的成員,介導(dǎo)性激素信號(hào)傳導(dǎo),參與性腺發(fā)育、成熟等生理過程。弓背青鳉（Oryzias curvinotus）作為湛江本地紅樹林主要種,具有繁殖力強(qiáng)、世代周期短、廣鹽性等特點(diǎn),具有開發(fā)為模式生物的潛力。本研究對弓背青鳉進(jìn)行了RT-qPCR的內(nèi)參基因篩選;初步探究了弓背青鳉雌、雄激素受體基因表達(dá)特征與功能。同時(shí)為了評估EEs給生物體帶來的潛在危害風(fēng)險(xiǎn),篩選出合適的EEs監(jiān)測生物標(biāo)志物,本研究對雌二醇（E₂）處理24 h弓背青鳉仔魚進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,并篩選出顯著上調(diào)基因,評估其對雌激素處理的響應(yīng)特性及對雙酚A處理的敏感程度。主要結(jié)果如下:1、對弓背青鳉進(jìn)行RT-qPCR內(nèi)參基因的篩選,通過RefFinder預(yù)測,結(jié)合geNorm、NormFinder和Bestkeeper分析,結(jié)果顯示使用eef1... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

雌激素及其類似物誘導(dǎo)下的Chg與Vtg合成的簡圖(ChenX.2007)

弓背青鳉雌、雄激素受體基因?qū)Υ萍に仨憫?yīng)及雌二醇處理轉(zhuǎn)錄組分析122.2結(jié)果2.2.1管家基因引物檢驗(yàn)及cDNA和DNA擴(kuò)增產(chǎn)物比較各候選的管家基因PCR擴(kuò)增檢測結(jié)果如圖2-1所示，其中，各候選管家基因引物以cDNA為模板所擴(kuò)增的產(chǎn)物，均比以DNA為模板擴(kuò)增的產(chǎn)物片段短，這證實(shí)了所用的cDNA模板中無基因組DNA污染。與此同時(shí)，測序成功的候選內(nèi)參基因序列信息經(jīng)與本地轉(zhuǎn)錄組預(yù)測序列比對，并通過blastn在線軟件證實(shí)其擴(kuò)增是特異性的。圖2-1不同模版(水、cDNA、DNA)檢測不同管家基因特異性引物Fig.2-1Testingofdifferenttemplates(ddH2O,cDNA,DNA)withspecificprimers注：1為DNA；2為水；3為cDNA；M為DL2000DNAMarkerNote:1:DNA;2:water;3:cDNA;M:DL2000DNAMarker2.2.2管家基因標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制根據(jù)在連續(xù)梯度稀釋濃度下的cDNA作為RT-qPCR模板所得各管家基因的Ct值，繪制出各管家基因RT-qPCR的擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，從而計(jì)算出擴(kuò)增曲線的斜率k以及線性相關(guān)系數(shù)R2，根據(jù)公式計(jì)算擴(kuò)增效率E=10-(1/k)-1，結(jié)果如圖2-2所示，各管家基因的線性相關(guān)系數(shù)為0.9914至0.9996，擴(kuò)增效率范圍為94.6%至103.4%。2.2.3管家基因表達(dá)穩(wěn)定性分析為了評估10種管家基因的mRNA表達(dá)穩(wěn)定性，以不同組織、不同胚胎發(fā)育階段、E2和BPA處理的cDNA作為模板進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增。如圖2-3所示，各

弓背青鳉雌、雄激素受體基因?qū)Υ萍に仨憫?yīng)及雌二醇處理轉(zhuǎn)錄組分析14圖2-3各系列模板管家基因Ct值比較Fig.2-3Expressionprofilesofcandidatereferencegenes圖2-4geNorm分析所有管家基因的平均表達(dá)穩(wěn)定值MFig.2-4Theaverageexpressionstabilityvalue(M)ofallthehousekeepinggenesanalysedbygeNormsoftware

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]弓背青鳉的胚胎發(fā)育及自發(fā)熒光觀察[J]. 張海瑞,王中鐸,黃順楷,汪淳,郭昱嵩,董忠典,劉楚吾.  廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(02)
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博士論文
[1]雙酚A （BPA）對稀有鮈鯽精子發(fā)生的影響及分子機(jī)制研究[D]. 張瑩瑩.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
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碩士論文
[1]雷州半島紅樹林區(qū)仔稚幼魚多樣性及弓背青鳉對壬基酚的響應(yīng)[D]. 廖健.廣東海洋大學(xué) 2017
[2]七彩神仙魚（Symphysodon haraldi）性腺轉(zhuǎn)錄組分析及vasa基因的時(shí)空表達(dá)[D]. 林睿涓.上海海洋大學(xué) 2017
[3]興國紅鯉ERs、AR基因的克隆表達(dá)及EE2、MT暴露對幼魚肝中ERs、AR基因表達(dá)的影響[D]. 宋明月.上海海洋大學(xué) 2016
[4]金錢魚雄激素受體的克隆及其表達(dá)模式的研究[D]. 戴明莉.廣東海洋大學(xué) 2015
[5]17β-雌二醇對斑馬魚的毒性研究[D]. 李國超.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[6]稀有鮈鯽ER基因的克隆及內(nèi)分泌干擾物對其表達(dá)的影響[D]. 王厚鵬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[7]大黃魚雌激素受體與雄激素受體基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 蒲魯魯.集美大學(xué) 2011
[8]南方鲇雄激素受體（AR）全長cDNA的克隆及分析[D]. 黃寶鋒.西南大學(xué) 2008
[9]雌激素受體在小鼠早期胚胎發(fā)育中的表達(dá)[D]. 李丹丹.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[10]唐魚雌激素受體cDNA克隆及表達(dá)分析[D]. 管昕.華南師范大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3510317