旨在篩選出小鼠睪丸組織中最優(yōu)內(nèi)參基因,為研究小鼠睪丸發(fā)育過程中的目的基因表達(dá)提供基礎(chǔ)依據(jù).以小鼠作為研究對(duì)象,采用Trizol法提取4個(gè)不同發(fā)育時(shí)期（1周齡、3周齡、6周齡、9周齡）睪丸組織總RNA并反轉(zhuǎn)錄獲得其cDNA.且根據(jù)已有報(bào)道,選出小鼠常見相對(duì)穩(wěn)定的7種內(nèi)參基因β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）、肽基異構(gòu)酶A（PPIA）、酸性核糖體磷酸蛋白（ARBP）、18S核糖體RNA（18S rRNA）、琥珀酸脫氫酶復(fù)合黃蛋白亞基A（SDHA）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）和次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶1（HPRT1）的GenBank登陸序列設(shè)計(jì)所需熒光定量引物,結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)分別驗(yàn)證候選基因引物特異性并構(gòu)建以睪丸組織為模板各基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并通過GeNorm程序?qū)Ω骰蚍�(wěn)定性進(jìn)行分析,篩選出小鼠睪丸中最適內(nèi)參基因.結(jié)果表明,各個(gè)時(shí)期睪丸組織RNA電泳條帶沒有出現(xiàn)彌散和拖帶的現(xiàn)象;所設(shè)計(jì)的候選基因引物條帶單一沒有雜帶且RT-qPCR溶解曲線均呈現(xiàn)單一信號(hào)峰,并具有良好的線性關(guān)系;候選基因穩(wěn)定性值（M值）進(jìn)行排序:PPIA=β-actin>ARBP>... 

【文章來源】：西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,46(05)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

睪丸組織RNA的電泳結(jié)果

使用GeNorm程序?qū)⒛骋粋�(gè)內(nèi)參基因與其他選擇的內(nèi)參基因表達(dá)水平的兩兩比值經(jīng)對(duì)數(shù)變換,然后計(jì)算出的平均標(biāo)準(zhǔn)差作為基因表達(dá)穩(wěn)定性的平均值(M值).本研究所選7個(gè)管家基因PPIA、β-actin、ARBP、HPRT1、SDHA、18S rRNA和GAPDH對(duì)應(yīng)的M值分別為0.513、0.513、0.804、1.154、3.179、4.481、5.021,表達(dá)穩(wěn)定性順序?yàn)镻PIA=β-actin>ARBP>HPRT1>SDHA>18S rRNA>GAPDH.如圖所示,7種候選內(nèi)參基因最穩(wěn)定的是PPIA和β-actin,最不穩(wěn)定的為GAPDH(圖5).圖3 小鼠睪丸組織中7個(gè)內(nèi)參基因RT-qPCR溶解曲線

小鼠睪丸組織中7個(gè)內(nèi)參基因RT-qPCR溶解曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠卵巢組織定量PCR分析中內(nèi)參基因的篩選[J]. 楊顯英,熊顯榮,韓杰,黃向月,王艷,阿果約達(dá),李鍵.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）內(nèi)參基因的選擇[J]. 李光超,武小虎,馬友記,張勇,趙興緒.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(02)
[3]家兔不同發(fā)育階段和組織中內(nèi)參基因的穩(wěn)定性分析[J]. 陳瑞,楊曉農(nóng),曾婉秋,文娟.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(03)



本文編號(hào)：3510169