家蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)之一,也是非常重要的模式昆蟲(chóng)和實(shí)驗(yàn)材料,蠶蛹是重要的蠶桑產(chǎn)業(yè)副產(chǎn)物,對(duì)蠶蛹脂肪酸組成及其合成機(jī)制的研究可以為蠶蛹的綜合利用提供理論依據(jù),對(duì)家蠶脂肪酸合成代謝的分子機(jī)制研究顯得十分必要。本論文基于家蠶最新基因組數(shù)據(jù)庫(kù)資源,通過(guò)生物信息分析方法對(duì)家蠶脂肪脫氫酶進(jìn)行克隆、序列分析,并對(duì)家蠶BmFAD3-like和BmD6DES基因進(jìn)行了表達(dá)模式、原核表達(dá)、釀酒酵母表達(dá)等研究,為探究BmFAD3-like和BmD6DES基因的功能,對(duì)低溫誘導(dǎo)、真菌侵染和RNAi的處理后的蠶蛹體內(nèi)兩個(gè)基因的mRNA相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行了初步研究。獲得如下研究結(jié)果:1.家蠶BmFAD3-like和BmD6DES基因的克隆及序列分析利用脂肪酸脫氫酶蛋白保守的組氨酸結(jié)構(gòu)域序列對(duì)家蠶基因組序列進(jìn)行同源性檢索,設(shè)計(jì)合成特異性引物,從蠶蛹中分別克隆到1 083 bp和1 335 bp的cDNA片段,分別命名為BmFAD3-like和BmD6DES。利用cDNA末端快速快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）對(duì)兩個(gè)脂肪酸脫氫酶基因進(jìn)行了cDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增,BmFAD3-like全長(zhǎng)為1 727 bp,開(kāi)放閱讀框（ORF）全... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

陽(yáng)性轉(zhuǎn)化菌的菌液PCR鑒定泳道：M，L2000marker1-8，pYBmFAD3-like陽(yáng)性轉(zhuǎn)化菌菌液PCR結(jié)果，12-17，pYBmD6DES

PCR product of the pYBmD6DES positive recombinantA B圖4.5 重組質(zhì)粒pYBmFAD3-like 和pYBmD6DES 的雙酶切鑒定圖A 泳道1 ，pYBmFAD3-like 質(zhì)粒，2 ，pYBmFAD3-like 質(zhì)粒經(jīng)Hind III 、XbaI 雙酶切3，BmFAD3-like PCR 產(chǎn)物 M，DL10 000 DNA marker 圖 B 泳道：1，pYBmD6DES 質(zhì)粒 2，pYD6DES

檢測(cè)BmFAD3-like 和 BmD6DES 基因的功能，分別用 和 pYBmD6DES 轉(zhuǎn)化釀酒酵母細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)基和 YBmD6DES，經(jīng)半乳糖誘導(dǎo)時(shí)分別加入亞油酸(LA培養(yǎng)產(chǎn)物的總脂肪酸。脂肪酸經(jīng)三氟化硼-甲醇甲酯準(zhǔn)品（Sigma 18918-1AMP）作為標(biāo)準(zhǔn)，以空載體 pY物作為對(duì)照進(jìn)行 GC 分析。結(jié)果酵母工程菌株 YBm生了與混合脂肪酸甲酯中標(biāo)準(zhǔn)品 α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品體的對(duì)照樣中沒(méi)有出現(xiàn)相應(yīng)的峰(圖 4.7B、4.7C)。A.8%，底物亞油酸轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物 α-亞麻酸（ALA）的轉(zhuǎn)化率母工程菌株 YBmD6DES 氣相色譜檢測(cè)圖譜上產(chǎn)生了準(zhǔn)品 γ-亞麻酸甲酯的保留時(shí)間相同的峰，而在空載體 4.6B、4.6C)。γ-亞麻酸 GLA 含量占細(xì)胞總脂肪酸含化為產(chǎn)物 α-亞麻酸（ALA）的轉(zhuǎn)化率為 6.5％(表 4.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]棉花幼苗對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)及抗冷機(jī)制初步研究[J]. 王俊娟,王帥,陸許可,陰祖軍,王德龍,樊偉莉,穆敏,郭麗雪,葉武威,喻樹(shù)迅.  棉花學(xué)報(bào). 2017(02)
[2]滇牡丹ω-3脂肪酸脫氫酶基因克隆與功能分析[J]. 朱金鑫,孫金金,原曉龍,王娟,楊宇明,王毅.  中國(guó)油脂. 2017(02)
[3]胡麻脂肪酸脫氫酶基因fad3b過(guò)表達(dá)小鼠模型的建立及其功能分析[J]. 魏著英,菅璐,楊磊,高陽(yáng),王東,陳晨,左永春,李光鵬.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
[4]深黃被孢霉Δ6-脂肪酸脫氫酶基因在畢赤氏酵母SMD1168中表達(dá)的研究[J]. 王長(zhǎng)遠(yuǎn),全越,沈冰蕾,姚笛,于長(zhǎng)青.  農(nóng)產(chǎn)品加工. 2016(14)
[5]千里光脂肪酸脫氫酶（D6D）的保守基序（CSM）與功能結(jié)構(gòu)域分析[J]. 王蕾,羅才林,徐德林,錢(qián)剛.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(06)
[6]鏡鯉△6脂肪酸脫氫酶CDNA的克隆與表達(dá)[J]. 吳景,鄭先虎,匡友誼,呂偉華,曹頂臣,冬方,何立川,孫效文.  水產(chǎn)學(xué)雜志. 2015(01)
[7]花生ω-3△15-脂肪酸脫氧酶基因AhFAD3A的克隆及其表達(dá)[J]. 吳列洪,李付振,吳學(xué)龍,宋度林,王美興.  中國(guó)油料作物學(xué)報(bào). 2015(01)
[8]低溫和外源不飽和脂肪酸對(duì)高山被孢霉脂肪酸脫氫酶基因表達(dá)的影響[J]. 于愛(ài)群,石桐磊,張飆,邢來(lái)君,李明春.  微生物學(xué)報(bào). 2012(11)
[9]家蠶和野桑蠶脂肪酸脫氫酶desat4全長(zhǎng)cDNA和啟動(dòng)子的克隆及其原核表達(dá)[J]. 陳全梅,程道軍,馬振剛,胡曉明,查幸福,趙萍.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2012(08)
[10]低溫對(duì)2種紫草科植物△6-脂肪酸脫氫酶基因表達(dá)的影響[J]. 張芳轉(zhuǎn),周晶,陳光輝,李冠.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2011(08)

博士論文
[1]家蠶新突變體二齡不眠蠶基因的定位克隆及功能研究[D]. 吳凡.江蘇科技大學(xué) 2016
[2]花生四烯酸和二十碳五烯酸合成途徑的構(gòu)建及大豆種子特異性啟動(dòng)子的改造[D]. 黎明.南開(kāi)大學(xué) 2012
[3]月見(jiàn)草△6-脂肪酸脫氫酶基因的克隆與異源表達(dá)[D]. 黃勝和.內(nèi)蒙古大學(xué) 2009
[4]中間錦雞兒油酸脫氫酶（FAD2）基因克隆及酵母表達(dá)調(diào)控的研究[D]. 林萍.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2008
[5]ω-3脂肪酸去飽和酶基因的克隆、鑒定及轉(zhuǎn)基因小鼠的制備[D]. 朱貴明.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006

碩士論文
[1]南極冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L脂肪酸脫氫酶基因及其細(xì)胞膜流動(dòng)性調(diào)控分子機(jī)制研究[D]. 綦曉青.國(guó)家海洋局第一海洋研究所 2016
[2]文冠果脂肪酸合成兩個(gè)關(guān)鍵酶基因FAE1、FAD2的克隆與表達(dá)分析[D]. 烏蘭巴特爾.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015
[3]深黃被孢霉誘變菌株Δ5脂肪酸脫氫酶基因在酵母中的表達(dá)[D]. 楊溪.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2015
[4]EPA合成相關(guān)酶基因?qū)γ藁ǖ倪z傳轉(zhuǎn)化[D]. 桂麗娟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]家蠶3-dehydroecdysone 3β-reductase基因在家蠶免疫體系中的功能分析[D]. 周良宵.西南大學(xué) 2013
[6]紫蘇ALA積累模式及ω-3脂肪酸脫氫酶基因的克隆與原核表達(dá)[D]. 鄒燕.重慶師范大學(xué) 2012
[7]落葉松毛蟲(chóng)蛹油的提取、分析及其抗氧化穩(wěn)定性的研究[D]. 胡禮禹.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[8]橘林油脂酵母△9-和△15-脂肪酸去飽和酶基因的克隆及功能驗(yàn)證[D]. 張燕.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]家蠶羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及原核表達(dá)[D]. 楊微.重慶大學(xué) 2011
[10]鱸魚(yú)BHMT基因的cDNA克隆和組織表達(dá)[D]. 宋娟娟.寧波大學(xué) 2011



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