【背景】人腸道病毒D68型（EV-D68）屬于小RNA病毒科腸道病毒屬人腸道病毒D組,在2014年8月至2015年1月間,該病毒引起的感染在北美顯著增多,我國也出現(xiàn)流行。相對于原始的Fermon毒株,流行株5′UTR區(qū)域幾乎都存在一兩處缺失,在起始密碼子ATG前還存在兩處ataaca重復(fù)序列,這兩處位點的功能尚未見報道�！灸康摹刻接懥餍兄�5′UTR區(qū)域的缺失對下游基因表達(dá)的影響,以及ataaca重復(fù)序列的功能�！痉椒ā客ㄟ^序列比對分析現(xiàn)階段流行株與原始毒株Fermon株5′UTR的差異以及保守區(qū)域,利用分子生物學(xué)方法缺失上述區(qū)域后,利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)分析5′UTR中上述區(qū)域?qū)ο掠螆蟾婊虻挠绊��！窘Y(jié)果】序列比對分析發(fā)現(xiàn),目前流行的EV-D68毒株在對應(yīng)于Fermon株基因組5′UTR的685-707區(qū)域發(fā)生了23個堿基的缺失,而部分毒株還在718-729區(qū)域發(fā)生了第二處缺失。熒光素酶結(jié)果顯示,僅第一處缺失可以極大地提高下游基因的表達(dá)量,同時具有兩處缺失則與野生型幾乎相當(dāng),而僅缺失第二段序列則降低了下游基因的表達(dá)量。此外,還發(fā)現(xiàn)第一處缺失中的序列可能對下游基因表達(dá)起到了抑制作用,而靠... 

【文章來源】：微生物學(xué)通報. 2020,47(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

EV-D68病毒5′UTR間隔區(qū)的序列比對

用于檢測EV-D68病毒5′UTR活性的雙熒光素酶報告載體的示意圖(A)和重組質(zhì)粒的PCR鑒定(B)

如圖3所示，相對于具有野生型5′UTR的質(zhì)粒(p5Ferm)，含有5′UTR第一段缺失序列的質(zhì)粒(p Del1)具有最高的熒光素酶相對表達(dá)量(2.053±0.115)；僅含有5′UTR第二段缺失序列的質(zhì)粒(p Del2)具有最低的熒光素酶相對表達(dá)量(0.424±0.012)；兩段序列同時缺失的質(zhì)粒(p Del Both)與野生型質(zhì)粒(p5Ferm)熒光素酶表達(dá)量居中，分別為0.999±0.048、0.963±0.078。上述結(jié)果表明，相對于野生型5′UTR，缺失第一段的5′UTR序列介導(dǎo)了下游報告基因最為高效的表達(dá)(P<0.05)，而僅缺失第二段的5′UTR則具有最低的下游報告基因表達(dá)量(P<0.05)；兩段同時缺失的5′UTR與野生型表達(dá)量沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。2.4 間隔區(qū)域ataaca序列缺失對下游基因表達(dá)的影響


本文編號：3499151