通過RACE技術(shù)成功獲得中華鱉（Pelodiscus sinensis）Wnt4基因的cDNA全長序列,并利用實時熒光定量PCR分析了該基因在不同組織、胚胎不同發(fā)育時期的表達特征以及Wnt激動劑（Wnt agonist 1）對其表達的影響。結(jié)果表明:中華鱉Wnt4基因cDNA全長2 432 bp,開放閱讀框為1 095 bp,編碼364個氨基酸。中華鱉Wnt4基因與海龜（Chelonia mydas）和三趾箱龜（Terrapene carolina triunguis）具有高度同源性。Wnt4基因在雌雄個體性腺中表達量最高,且雌性卵巢中表達水平顯著高于雄性精巢（P<0.05）。在胚胎不同發(fā)育時期（14～21期）雌雄性之間有明顯的表達差異（P<0.05）,推測其參與了中華鱉性別分化的過程。Wnt激動劑能上調(diào)Wnt4基因的表達水平,此結(jié)果為中華鱉性別分化機制的研究提供了參考。 

【文章來源】：海洋漁業(yè). 2020,42(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

中華鱉 Wnt4 基因

表1 中華鱉 Wnt4 基因擴增引物信息Tab.1 Information of primers for Wnt4 amplification in Pelodiscus sinensis 引物 Primer 序列(5′-3′) Sequence (5′-3′) 功能 Application Wnt4-CF GAGGTGATGGACTCGGTGCG 保守區(qū) Wnt4-CR CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC Wnt4-3′-GSP AAAGTGCTGGTGCCGAAAAAC 3′RACE Wnt4-3′-NGSP TTCAAACCACACACGGATGAGGAC Wnt4-5′-GSP CCACTGGAAGCCCTGGGGACTGACC 5′RACE M13-47 CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC 菌落 PCR M13-48 CTAATACGACTCACTATAGGGCAA UPM CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT RACE 引物 UPM short CTAATACGACTCACTATAGGGC Wnt4-F GAGGTGATGGACTCGGTGCG 熒光定量 PCR Wnt4-R CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC 18sRNA-F AAAGGAATTGACGGAAGGGCAC 內(nèi)參基因 18sRNA-R GCTCCACCAACTAAGAACGG中華鱉 Wnt4蛋白與海龜、三趾箱龜、美洲短吻鱷、裸鼢鼠、人、小鼠、斑馬魚、牙鲆、半滑舌鰨、櫛孔扇貝和厚殼貽貝等 11 個物種的蛋白序列多重比較分析見圖 2,其序列比較保守,與其他物種有 100 多個 Wnt 保守位點。

表2 不同物種與中華鱉Wnt4蛋白氨基酸序列同源性比對Tab.2 Comparative identity of amino acid sequence of Wnt4 物種 Species 登錄號 Accession number 同源性 Identity 海龜 Chelonia mydas XP_027684015.1 91.74% 三趾箱龜 Terrapene carolina triunguis XP_024064527.1 91.74% 美洲短吻鱷 Alligator mississippiensis KYO 30022.1 89.17% 達馬拉鼴鼠Fukomys damarensis KFO 32560.1 86.69% 裸鼢鼠 Heterocephalus glaber EHB 08913.1 86.69% 人 Homo sapiens BAC 23080.1 83.76% 小鼠 Mus musculus AAI 01963.1 83.48% 斑馬魚 Danio rerio AAA 96518.1 81.77% 牙鲆 Paralichthys olivaceus AGT 18276.1 81.77% 半滑舌鰨 Cynoglossus semilaevis AIJ 01347.1 80.91% 櫛孔扇貝 Azumapecten farreri AFU 35435.1 67.47% 厚殼貽貝 Mytilus coruscus APJ 36641.1 65.09%圖3 不同物種 Wnt4 蛋白氨基酸序列的系統(tǒng)進化樹

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3491461