羅伯茨綠僵菌（Metarhizium robertsii）屬于害蟲生防真菌,在農(nóng)林害蟲防治中起著非常重要的作用。因其作為真菌殺蟲劑具備安全、環(huán)保、易生產(chǎn)、貨架期長等優(yōu)點,多年來被廣泛研究。然而卻因殺蟲效率低、致死時間長、防效不穩(wěn)定等問題限制了它的大規(guī)模應(yīng)用。因此,系統(tǒng)深入了解羅伯茨綠僵菌的致病和抗逆機制,并對其進(jìn)行基因遺傳改良成為了當(dāng)下迫切需要的途徑。WD40重復(fù)蛋白CreC基因是碳分解代謝抑制途徑（CCR）中一個非常重要的調(diào)節(jié)因子,研究發(fā)現(xiàn)碳分解代謝抑制與昆蟲病原真菌的生長和致病性有密切的關(guān)系。本實驗以羅伯茨綠僵菌作為研究對象,通過基因敲除技術(shù)獲得CreC敲除株,進(jìn)一步分析CreC基因?qū)α_伯茨綠僵菌的生長發(fā)育和致病性的影響。研究結(jié)果表明:與野生型（Mr23）相比,敲除株（△MrCreC）在SDAY、1/4SDAY和PDA上菌落直徑明顯減小,在幾種碳源培養(yǎng)基上的生長速度減慢;產(chǎn)孢量相比野生型下降了 65%,同時RT-PCR結(jié)果顯示與產(chǎn)孢量相關(guān)的基因大部分轉(zhuǎn)錄水平顯著降低;敲除株在含剛果紅、雙氧水、氯化鈉和氯化鉀培養(yǎng)基上抑制生長更明顯,相比野生型相對抑制率分別增加了 14%,8%,7%,... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ｇ蛋白Ｐ亞基三維結(jié)構(gòu)１３９１??Ｆｉ１?Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆＧｒｏｔｅｉｎ?ｂｅｔａ?ｓｕｂｕｎｉｔ??

?＼??ｎｏｔ?ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ???１?１—?■＇?一??Ｂ：?Ｄｅｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?舊??ｆ?．＇?Ｂ＠ｉ??ｔ—ｐｇｇｇｇｐｐ＾－????１?ｕ？ｉ￣ｉ￣啼???Ｃ〇Ｍ３＊－Ｕｐ－??嫌?－一，卿——《？＊■？＊?ｊ?？３＊＾ｉｒ＜＾ｓｓＳｆ＞ｎ??，?Ｐｒｏｔ＊？ｓ？ｆｎ？?；?－??〇？Ｃ?ｉ?／?Ｐ＊￡ＳＴ?ｐａｔｈｗａｙ??＾＞－ＵＳ?；?一觸ｏｎ、各、??．．．．．．．Ｉ?ＣｒｃＡ??圖２絲狀真菌中的碳分解代謝抑制調(diào)控網(wǎng)絡(luò)［ＷＩ??Ｆｉｇ?２?Ｃａｒｂｏｎ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｉｎ?ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ?ｆｕｎｇｉ??１．３３真菌碳分解代謝研究現(xiàn)狀??碳分解代謝抑制（ＣＣＲ）是存在于很多的微生物有機體中的一種調(diào)控機制。在構(gòu)巢曲??霉中，編碼各種碳源所需酶的基因受到碳分解代謝的抑制。通過分析鑒定，與碳分解代??謝抑制相關(guān)的基因有Ｃｒｅ兒０５，?ＯｅＣ和０辦６８］，當(dāng)它們發(fā)生突變時，會導(dǎo)致碳分解??代謝抑制的反應(yīng)發(fā)生改變，構(gòu)巢曲霉可以使用一系列化合物作為碳和氮的來源，如Ｌ－??脯氨酸或乙酰胺等。這類化合物所需基因的表達(dá)受碳分解代謝抑制的調(diào)節(jié)。??在稻瘟病菌中，參與碳分解代謝抑制調(diào)控新的調(diào)節(jié)因子被確定：糖傳感器ＴＰＳ１、??抑制劑蛋白ＮＭＲ１－３和ＭＤＴ１。研宄發(fā)現(xiàn)ＴＰＳ１通過ＮＭＲ１－３的失活激活了碳分解代謝??抑制途徑，從而響應(yīng)葡萄糖－６－磷酸傳感。通過分析發(fā)現(xiàn)ＭＤＴ１是一種葡萄糖代謝調(diào)節(jié)??６??

４結(jié)果與分析??４．１?ＣｒｅＣ基因序列分析??４．１．１?Ｃ／ｒＣ基因生物信息學(xué)分析??ＣｒｅＣ基因全長有２４１４ｂｐ，ｍＲＮＡ長度為１９２０ｂｐ，編碼含有６３９個氨基酸的蛋白??質(zhì)。用ＥｘＰＡＳｙ在線檢測軟件對ＣｒＫ基因進(jìn)行預(yù)測，分子量為６９．８ｋＤａ，理論等電點??為６．００。在ＮＣＢＩ網(wǎng)站對其編碼的蛋白進(jìn)行分析可知，該基因含有ＷＤ４０家族保守功能??域，含有４個ＷＤ４０重復(fù)基元（圖３，?ｂ藍(lán)色劃線部分）。對其三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬（圖??３，?ｃ），可觀察到Ｐ－螺旋槳結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)的ＷＤ重復(fù)基元可參與蛋白與蛋白的相互作用。??（ａ）?！一?卜今卜卜??＂＾３００?＊４００?＇?ＳＯＯ??ＭＦＶＬＰＰＰＰＲＹＰＩＧＯＰＹＧＡＴＣＴＴＧＩＶＰＭＩＥＴＮＮＴ１ＳＮＰＴＧＰＥＷＱＦＬＶＧＥＧＴＹＶＬＫＥＤ??ＬＨＬＡＴＰＰＰＨＰＳＥＡＰＩＶＮＰＮＰＬＡＴＮｎＰＱＰＡＳＶＧＴＫＭＴＬＶＲＩＱＳＲＰＰＰＦＦＹＲＧＰＳＡＴＴＬＳＬＧ??ＧＡＳ?Ｓ?ＱＤＱ?Ｓ?ＧＯ?ＡＲＹＳＴＥ?ＧＧＭＳ?ＳＥＤ?ＧＲＯＴＳ?ＴＳＤＡＰＮＳＡＴＬＧＦ?ＴＰＡＦ?ＧＥＧＮＳＬＬＶＰＳ?ＱＴ??ＫＤＶＮＫＲＫＫＰＫＮＮＶＴＫＳＮＳＳＦＩＳＲＶＩＶＮＥＳＬＳＲＲＭＴＤＲＰＧＤＧＩＦＡＦＡＮｒＮｒＲＡＦＱＷＬＤ??Ｌ?Ｓ?ＳＰＮＫＱＤ?ＹＦＴＫＩＬＦＴＫＡＨＣＬ?ＳＨＤ?ＶＮＭＶＴＫＧＡＳＨＩＤ?ＶＬＭＧＦＳＴＧＥＩＩＷＷＥＰＩＳＱＲＹＴ??ＲＭＸＫＺＶＧＶＩＸＮＴＰ＇＾ＴｍＫＷＩＰＧＳＥＮＬＦＬＡＡＨＡｒＰＧＳＩＡ＾ＨＫＥＫＤＤＳＯＦＴＰＥＤＤＥ??ＴＳＶＨＧＳＥＳＧＨＧＯＮＧＶＫＰＧＴＫＭＨＩＡＫＳＶＨＳＯＮＯＫＴＮＰＶＡＡＷＫＬＳＮＯＲＩＸＳＦＡＦＳＰ?


本文編號：3461468