WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族參與植物對逆境的響應(yīng),該家族成員均含有一個保守的WRKY結(jié)構(gòu)域,可通過結(jié)合下游靶基因啟動子區(qū)的W-box來調(diào)節(jié)植物的生理生化反應(yīng)。本試驗中,我們從轉(zhuǎn)錄組中篩選出一個甜高粱SbWRKY50（Sb09G005700）基因,并將該基因在野生型擬南芥中過量表達(dá)獲得過表達(dá)株系W50-12,W50-13。利用在線網(wǎng)站對該基因的生物信息學(xué)進(jìn)行了分析,構(gòu)建了帶有GFP標(biāo)簽的載體對SbWRKY50的定位進(jìn)行分析,構(gòu)建了pGBKT7-SbWRKY50載體對其進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄活性分析。測定和分析了鹽處理下野生型和過表達(dá)植株在萌發(fā)期和苗期的各項生理指標(biāo),并篩選到該基因調(diào)控的下游靶基因,并通過熒光定量PCR、酵母單雜交和熒光素酶互補(bǔ)實驗進(jìn)行驗證,闡明該基因調(diào)控植物抗鹽的作用機(jī)制。本研究的主要結(jié)論是:1、SbWRKY50的CDS序列全長621bp,共編碼207個氨基酸,其N端具有一個保守的WRKY結(jié)構(gòu)域,C端具有一個C₂H₂的鋅指結(jié)構(gòu),屬于典型的II類WRKY家族蛋白。該蛋白的分子式為C₉₆₉H₁₄₅₃N

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SbWRKY50的氨基酸序列（A）和結(jié)構(gòu)域（B）

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文72.2SbWRKY50蛋白序列的親疏水性分析圖2-2.SbWRKY50蛋白的親疏水性分析Fig.2-2.HydrophilicanalysisofSbWRKY50protein通過ExPASy在線網(wǎng)站對SbWRKY50蛋白序列進(jìn)行親疏水性分析，在該分析中，分值越大表示蛋白的疏水性越強(qiáng)。從圖2-2可看出，SbWRKY50蛋白的分值大部分都是大于0的，所以SbWRKY50為疏水蛋白。2.3SbWRKY50信號肽及跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測及分析通過TMHMM、Signal-5.0在線網(wǎng)站來分析SbWRKY50蛋白，從圖2-3中可看出，SbWRKY50蛋白既無信號肽也無跨膜結(jié)構(gòu)域。

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文8圖2-3.SbWRKY50蛋白的信號肽（A）及跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測（B）Fig.2-3.Signalpeptide(A)andtransmembranestructureprediction(B)ofSbWRKY502.4SbWRKY50蛋白與其他同源蛋白的關(guān)系通過DNAMAN軟件對甜高粱SbWRKY50蛋白序列和其他物種中的同源蛋白序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)他們都有WRKYGQK核心序列和C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)，同源性比較高，因此SbWRKY50蛋白屬于WRKY家族分類的第II類（圖2-4A）。通過MEGA6軟件對這些同源基因建立系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)，SbWRKY50蛋白與PhWRKY51蛋白親緣關(guān)系最近（圖2-4B）。

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本文編號：3454649