背景Wnt3是19種Wnt信號蛋白家族成員之一,大量文獻報道Wnt3的異常表達通過激活經(jīng)典Wnt信號通路調(diào)控多種人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）是全世界范圍內(nèi)最常見和對人類健康威脅最大的消化道惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展機制目前尚不十分清楚。因此,探究Wnt3基因在結(jié)直腸癌發(fā)病過程中的分子機制是十分必要的。目的檢測Wnt3基因在CRC組織及癌旁正常組織中的表達情況;探究Wnt3基因?qū)RC細胞的增殖能力、遷移能力、體內(nèi)外成瘤能力以及對細胞周期和藥物敏感性的影響;探究Wnt3基因促進CRC發(fā)病發(fā)展的內(nèi)在分子機制。方法1.通過qRT-PCR和Western blot,分析Wnt3基因在CRC組織及癌旁正常組織中的表達情況。2.構(gòu)建穩(wěn)定過表達或敲低Wnt3基因的CRC細胞系:a)轉(zhuǎn)染細胞:構(gòu)建可以特異性靶向Wnt3 mRNA的shRNA質(zhì)粒和過表達Wnt3的pEX4質(zhì)粒并進行擴增保存,轉(zhuǎn)染HCT-116細胞。b)篩選細胞:用高濃度G418藥物持續(xù)篩選。c)細胞鑒定:通過qRT-PCR鑒定Wnt3 mRNA的表達水平與預(yù)期一致,而且在蛋白質(zhì)表達水平也與預(yù)期... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
引言
1．材料、試劑、儀器
    1.1 實驗材料
    1.2 購買試劑
    1.3 配制試劑
    1.4 主要儀器
2．實驗方法及步驟
    2.1 質(zhì)粒提取
    2.2 細胞培養(yǎng)
    2.3 穩(wěn)定表達的CRC細胞篩選
    2.4 單克隆細胞HCT-116 篩選
    2.5 RNA提取、c DNA反轉(zhuǎn)錄和q RT-PCR
    2.6 蛋白樣品制備
    2.7 Western blot
    2.8 細胞增殖實驗
    2.9 細胞劃痕實驗
    2.10 細胞集落形成實驗
    2.11 細胞周期和凋亡實驗
    2.12 順鉑藥物敏感性試驗
    2.13 裸鼠腫瘤形成實驗
    2.14 統(tǒng)計分析
3．實驗結(jié)果
    3.1 Wnt3基因在CRC組織及細胞系中過表達
    3.2 篩選穩(wěn)定過表達和敲低Wnt3基因的HCT-116 單克隆細胞
    3.3 過表達Wnt3基因促進CRC細胞的增殖，遷移和腫瘤生長
    3.4 過表達Wnt3基因激活經(jīng)典Wnt信號通路并降低CRC細胞對化療藥物的敏感性
    3.5 敲低Wnt3基因抑制了CRC細胞的增殖，遷移和腫瘤生長
    3.6 敲低Wnt3基因阻滯細胞周期并促進順鉑誘導(dǎo)的CRC細胞凋亡
    3.7 敲低Wnt3基因抑制經(jīng)典Wnt信號通路并增強CRC細胞對順鉑的敏感性
    3.8 敲低Wnt3基因在經(jīng)典Wnt信號通路中通過c-Myc抑制糖酵解
4．討論
5．結(jié) 論
參考文獻
綜述 Wnt信號蛋白家族成員與結(jié)直腸癌發(fā)病的關(guān)系
    參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Colorectal cancer screening: An updated review of the available options[J]. Iyad A Issa,Malak Noureddine.  World Journal of Gastroenterology. 2017(28)
[2]Colorectal cancer population screening programs worldwide in 2016: An update[J]. Mercedes Navarro,Andrea Nicolas,Angel Ferrandez,Angel Lanas.  World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[3]Wnt3a:functions and implications in cancer[J]. Sha He,Yi Lu,Xia Liu,Xin Huang,Evan T.Keller,Chao-Nan Qian,Jian Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2015(12)



本文編號：3451215