【目的】昆蟲海藻糖酶能夠調(diào)控幾丁質(zhì)代謝并控制蛻皮過(guò)程。本研究通過(guò)TRE表達(dá)被抑制后,檢測(cè)褐飛虱（Nilaparvata lugens）蛻皮狀況、幾丁質(zhì)含量及幾丁質(zhì)合成酶（chitin synthase,CHS）和幾丁質(zhì)酶（chitinase,Cht）基因表達(dá)情況,探究不同的海藻糖酶（trehalase,TRE）在褐飛虱表皮中對(duì)幾丁質(zhì)代謝的調(diào)控作用。【方法】采用RNAi技術(shù),以實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)種群褐飛虱為材料,通過(guò)向其體內(nèi)注射雙鏈RNA（dsRNA）分別抑制單個(gè)海藻糖酶基因或同時(shí)抑制多個(gè)海藻糖酶基因,注射48 h后通過(guò)Trizol法提取褐飛虱總RNA,反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈DNA后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)該基因的表達(dá)情況,確定RNAi效果。氫氧化鉀法測(cè)定48 h褐飛虱整體幾丁質(zhì)含量變化并對(duì)蛻皮困難蟲體進(jìn)行拍照;最后采用qRT-PCR檢測(cè)褐飛虱CHS和Cht在mRNA水平上的相對(duì)表達(dá)量變化,分析TRE在調(diào)控幾丁質(zhì)代謝中的作用�！窘Y(jié)果】與注射dsGFP相比較,其余各注射組褐飛虱整體幾丁質(zhì)含量顯著下降,其中dsTRE1混合注射組與Validamycin注射組呈極顯著下降,同時(shí)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017,50(06)北大核心CSCD

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褐飛虱3個(gè)海藻糖酶基因表達(dá)被抑制后幾丁質(zhì)含量檢測(cè)及蛻皮情況

1052中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)50卷丁幾含質(zhì)量hitinContentc%)(圖2褐飛虱3個(gè)海藻糖酶基因表達(dá)被抑制后幾丁質(zhì)含量檢測(cè)及蛻皮情況Fig.2Thechitincontentdetectedandmoultingchangesafter3trehalasegenesexpressioninhibitedbythewayofRNAidsGFPdsTRE1-1dsTRE1-2dsTRE2dsTRE1sValidamycinA0.00.51.01.52.0*B0.00.20.40.60.81.01.21.41.6*C0.00.30.60.91.21.5表皮Cuticle相表達(dá)對(duì)量elatiRevxpreseiosn對(duì)相達(dá)量表elatRveixperseisno相表達(dá)對(duì)量elatiRevxpreseoniCHS1CHS1aCHS1b圖3褐飛虱3個(gè)海藻糖酶基因RNAi后幾丁質(zhì)合成酶及可變轉(zhuǎn)錄子在mRNA相對(duì)表達(dá)水平Fig.3TherelativeexpressionlevelofchitinsynthaseanditssplicingvariantsofN.lugensafter3trehalasegenesRNAi2.4TRE基因RNAi后幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)變化dsTRE1-1注射后48h，Cht1、Cht3、Cht8和Cht10表達(dá)下降，其中與注射dsGFP組相比較僅Cht8表達(dá)顯著下降，其余6個(gè)Cht表達(dá)上升，且Cht2和Cht5顯著上升；dsTRE1-2注射組中，Cht1、Cht6和Cht8表達(dá)下降，Cht2和Cht4表達(dá)顯著上升；dsTRE2處理組中，Cht1、Cht8和Cht10表達(dá)下降，而Cht9表達(dá)顯著上升；dsTRE1s注射后，Cht1和Cht5表達(dá)顯著下降，而Cht9表達(dá)顯著上升；海藻糖酶抑制劑Validamycin注射組中所有的10個(gè)幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)都顯著或極顯著下降。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)在4個(gè)TRE的dsRNA注射組中，Cht1和Cht8的表達(dá)下降，但并不是所有的處理組都顯著下降（圖4）。3討論RNAi是基因功能研究的有效工具，主要通過(guò)注射dsRNA或siRNA抑制基因的表達(dá)[25]。目前，RNAi技術(shù)已經(jīng)廣泛用于探索和研究昆蟲的相關(guān)基因功能，相關(guān)研究結(jié)果顯示當(dāng)昆

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]飛蝗海藻糖酶基因的分子特性及功能[J]. 劉曉健,孫亞文,崔淼,馬恩波,張建珍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(22)
[2]飛蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表達(dá)及酶學(xué)特性分析[J]. 宋慧芳,李應(yīng)龍,馬恩波,張建珍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(21)
[3]2000—2010年我國(guó)水稻病蟲害發(fā)生與為害特征分析[J]. 趙夢(mèng),歐陽(yáng)芳,張永生,李魏,曹婧,戈峰.  生物災(zāi)害科學(xué). 2014(04)
[4]昆蟲幾丁質(zhì)代謝與植物保護(hù)[J]. 張建珍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[5]昆蟲糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶研究進(jìn)展[J]. 屈明博,劉田,陳磊,陳琦,楊青.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[6]昆蟲海藻糖酶的基因特性及功能研究進(jìn)展[J]. 唐斌,魏蘋,陳潔,王世貴,張文慶.  昆蟲學(xué)報(bào). 2012(11)
[7]灰飛虱海藻糖酶基因的克隆及RNA干擾效應(yīng)[J]. 張倩,魯鼎浩,蒲建,吳敏,韓召軍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2012(08)
[8]昆蟲幾丁質(zhì)合成及其調(diào)控研究前沿[J]. 張文慶,陳曉菲,唐斌,田宏剛,陳潔,姚瓊.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2011(03)
[9]海藻糖——昆蟲的血糖[J]. 于彩虹,盧丹,林榮華,王曉軍,姜輝,趙飛.  昆蟲知識(shí). 2008(05)
[10]水稻品種對(duì)褐飛虱不同生物型抗性的HPLC分析[J]. 趙穎,黃鳳寬,童曉立,龐雄飛.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(02)

博士論文
[1]褐飛虱幾丁質(zhì)降解酶系基因家族分析[D]. 席羽.浙江大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3450812