為研究牛胚胎氣管（EBTr）細胞Toll樣受體2（TLR2）在牛皰疹病毒Ⅰ型（BHV-1）感染的天然免疫反應(yīng)中的作用,本研究利用小分子干擾RNA（si RNA）技術(shù),以TLR2為靶向設(shè)計并合成了3條si RNA干擾序列,用SYBR GreenⅠ定量PCR方法篩選出最佳的si RNA-TLR2干擾片段,繼而轉(zhuǎn)染EBTr細胞使其TLR2沉默后感染BHV-1,用Taq Man定量PCR方法檢測BHV-1不同時間點的增殖變化。結(jié)果顯示,與對照組相比轉(zhuǎn)染后第48小時si TLR2A、si TLR2B和si TLR2C在EBTr細胞中分別對TLR2 m RNA表達量下調(diào)了35.05%、69.20%和84.85%,篩選出的si TLR2C片段在第12⁷2小時可以顯著抑制TLR2 m RNA的表達（P<0.05）,用該片段轉(zhuǎn)染EBTr細胞再感染BHV-1后第6⁷2小時,si RNA-TLR2組BHV-1 DNA拷貝數(shù)顯著低于對照組BHV-1 DNA拷貝數(shù)（P<0.05）。本試驗成功篩選出了特異性抑制EBTr細胞TLR2基因的si RNA片段,并證... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學. 2016,46(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

TLR2熒光定量PCR的標準曲線

第周偉光等：靶向TLR2基因的siRNA對牛皰疹病毒Ⅰ型增殖規(guī)律的影響12期圖1脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA-TLR2后的EBTr細胞200×Fig.1MicrographsofsiRNA-TLR2transfectedEBTrcellsA：轉(zhuǎn)染EBTr細胞24h的白光顯微鏡照片；B：轉(zhuǎn)染EBTr細胞24h的熒光顯微鏡照片A：EBTrcellswereobservedunderwhitelightaftertransfecting24h；B：EBTrcellswereobservedunderfluorescence（B）microscopeaftertransfecting24h圖2TLR2熒光定量PCR的標準曲線Fig.2Thestandardcurveofreal-timePCRforTLR2圖3β-actin熒光定量PCR的標準曲線Fig.3Thestandardcurveofreal-timePCRforβ-actin35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.5102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循環(huán)數(shù)CyclenumberTLR2拷貝數(shù)/LTLR2copies/L35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.55.012345102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循環(huán)數(shù)cyclenumberβ-actin拷貝數(shù)/Lβ-actincopies/LAB1527

第周偉光等：靶向TLR2基因的siRNA對牛皰疹病毒Ⅰ型增殖規(guī)律的影響12期圖1脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA-TLR2后的EBTr細胞200×Fig.1MicrographsofsiRNA-TLR2transfectedEBTrcellsA：轉(zhuǎn)染EBTr細胞24h的白光顯微鏡照片；B：轉(zhuǎn)染EBTr細胞24h的熒光顯微鏡照片A：EBTrcellswereobservedunderwhitelightaftertransfecting24h；B：EBTrcellswereobservedunderfluorescence（B）microscopeaftertransfecting24h圖2TLR2熒光定量PCR的標準曲線Fig.2Thestandardcurveofreal-timePCRforTLR2圖3β-actin熒光定量PCR的標準曲線Fig.3Thestandardcurveofreal-timePCRforβ-actin35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.5102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循環(huán)數(shù)CyclenumberTLR2拷貝數(shù)/LTLR2copies/L35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.55.012345102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循環(huán)數(shù)cyclenumberβ-actin拷貝數(shù)/Lβ-actincopies/LAB1527

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3450759