三色堇（Viola tricolor）花色豐富、花期長(zhǎng)且耐寒,為世界知名的花壇花卉。但三色堇忌酷熱,較難適應(yīng)我國(guó)夏季高溫氣候條件,導(dǎo)致夏季育苗難、觀賞期縮短。發(fā)掘耐熱基因?qū)α私馄錈犴憫?yīng)機(jī)制具有重要意義。熱激蛋白（HSP）是熱響應(yīng)蛋白的重要組成部分,小分子熱激蛋白（sHSP）是熱激蛋白家族最重要的蛋白之一。本試驗(yàn)以三色堇耐熱自交系DFM-16在42℃熱激處理1 h、2 h的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為背景,為了研究熱脅迫下不同材料在不同時(shí)間段的表達(dá)情況,對(duì)三色堇小分子熱激蛋白基因家族進(jìn)行定量及序列分析,為進(jìn)一步了解三色堇小分子熱激蛋白基因的結(jié)構(gòu)及功能對(duì)其進(jìn)行克隆及表達(dá)載體構(gòu)建。研究結(jié)果如下:1.基于三色堇熱脅迫轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果,篩選出15個(gè)sHSP基因。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別對(duì)15個(gè)sHSP基因在2份材料42℃處理1 h,2 h,6 h,12 h表達(dá)情況進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,15個(gè)sHSP基因均受熱脅迫誘導(dǎo),為三色堇熱響應(yīng)基因。耐熱材料DFM-16在熱激下的轉(zhuǎn)錄水平和對(duì)照相比表達(dá)最高峰主要集中在1 h和12 h,12 h仍然無(wú)明顯回落趨勢(shì)。熱敏材料08H在熱激下的轉(zhuǎn)錄水平和對(duì)照相比表達(dá)最高峰主要集中在... 

【文章來(lái)源】：河南科技學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三色堇葉片總RNA電泳檢測(cè)Fig.2-1AgrosegelelectrophoresisanalysisoftotalRNAofpansyleaf

17.9-2 TCCTGAGCCCAAGAAACC CAAACATCACAGAACGAP18.1 CTCCACCTCCACTTTCACTT AATGCACCAAACTCCP18.2 TCCCACTGCTCCGCTCCATC TTCTGCATTTGTGAACP22-1 TCGCTCGGTCAATCGTCT GCTTCCAGGGAACTAP22-2 CCCGCCCATAATCTCCTA GGTGGTGCCGAAAGTSP24 TTCGAGCAAACACTACCC AAAGTCCTGCCCAAAP26.3 GGTGGAAGTAAGAAGACGACG GGAAACTCCTCCGAC26.4-1 ATGCAATCGGCAGGGAGT CAAGGCAACCAAGGA26.4-2 TAGCACCGGCAAACAGAG GTGAAGGCGGAGATG DFM-16 和 08H 熱激處理 2 h 的 cDNA 為模板通過(guò) PCR 對(duì) 15 對(duì)引檢測(cè)，PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示所有引物均特異性條帶（圖 2-2），可以用于后續(xù)熒光定量 PCR 試驗(yàn)。

24圖 2-3 sHSP 家族基因在不同熱激Fig.2-3 Quantitative analysis of sHSP family ge注：a:VtHSP1; b:VtHSP17-1; c:VtHSP17-2g:VtHSP17.9-2; h:VtHSP18.1; i:VtHl:VtHSP24 ;m:VtHSP26.3; nVtHSP17-2 和 VtHSP22-1 基因在耐VtHSP17-2 的表達(dá)模式為，1 h 升高 2 h o

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[5]陸地棉熱激蛋白基因sHSP7和sHSP8的克隆及功能分析[D]. 葛曉陽(yáng).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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