目的:探討HS3ST2基因?qū)Υ笫驡H3細(xì)胞系中Wnt通路及ECM-受體相互作用通路相關(guān)分子表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制。方法:對大鼠GH3細(xì)胞中HS3ST2基因的表達(dá)進(jìn)行干擾,通過蛋白質(zhì)印記（Western-Blot）及熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR）法檢測Wnt通路和ECM受體相互作用通路相關(guān)基因（β-catenin、WIF1、LEF1、SDC4）在m RNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)量的不同。結(jié)果:干擾GH3細(xì)胞中HS3ST2基因表達(dá)后,HS3ST2基因的m RNA及蛋白表達(dá)水平降低,同時其修飾的硫酸乙酰肝素蛋白多糖蛋白（HSPG）表達(dá)量降低;Wnt信號通路中β-catenin、LEF1基因m RNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平升高（P<0.05）,而WIF1基因的m RNA及蛋白表達(dá)量下降（P<0.05）;ECM受體相互作用通路中SDC4基因的m RNA及蛋白表達(dá)量下降（P<0.05）。結(jié)論:本研究中,HS3ST2基因通過調(diào)控Wnt信號通路及ECM受體相互作用通路相關(guān)基因的表達(dá)促進(jìn)GH3細(xì)胞增殖及侵襲性的發(fā)生。為尋找新的GH垂體腺... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡直視下128實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高

162.RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：向GH3細(xì)胞中轉(zhuǎn)入可干擾HS3ST2基因表達(dá)的shRNA以后，與NC組相比，HS3ST2基因的mRNA相對表達(dá)量降低（P<0.01），說明了shRNA的有效性。WNT通路內(nèi)的β-catenin與LEF1基因的mRNA相對表達(dá)量增多（P<0.01），說明HS3St2基因下調(diào)促進(jìn)了Wnt通路的運(yùn)轉(zhuǎn)。WIF1基因的mRNA相對表達(dá)量減少（P<0.01），WIF1基因是Wnt通路的抑制基因，符合上面結(jié)果；ECM通路中SDC4基因的mRNA相對表達(dá)量減少（P<0.01）。說明ECM通路由于HS3ST2基因的下調(diào)而被部分抑制，至少SDC4這個基因的表達(dá)受到了抑制。（圖3）圖3：敲出HS3ST2基因后應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對Wnt通路及ECM受體相互作用通路中研究的基因mRNA相對表達(dá)量檢測匯總。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3438155