發(fā)布時(shí)間：2021-10-15 14:57

　　【方法】利用PCR方法對綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）新疆分離株MO-XJ p74基因進(jìn)行擴(kuò)增、克隆及測序,分析其分子特征。將P74蛋白抗原集中區(qū)編碼序列亞克隆至表達(dá)載體p ET-32a（+）,構(gòu)建重組表達(dá)載體p ET-32a（+）-p74C,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)�！窘Y(jié)果】MO-XJ p74基因全長2016 bp,編碼671個(gè)氨基酸;對編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn),該蛋白不含信號肽序列,9³1位氨基酸序列含有1個(gè)跨膜區(qū),有16個(gè)N-糖基化位點(diǎn)、7個(gè)N-�；稽c(diǎn)、17個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)及5個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)。同源性分析顯示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列與標(biāo)準(zhǔn)株MO-SC01氨基酸序列同源率為86.5%,其羧基端為P74蛋白抗原集中區(qū)。SDS-PAGE檢測結(jié)果顯示,表達(dá)的P74蛋白抗原表位集中區(qū)片段對分子質(zhì)量約為35.5 k Da,與理論值相符;Western blot分析表明重組P74蛋白具有較強(qiáng)的反應(yīng)原性。【結(jié)論】本研究為進(jìn)一步篩選MO亞單位疫苗及血清學(xué)診斷的候選抗... 

【文章來源】：西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017,30(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與試劑
    1.2 引物設(shè)計(jì)
    1.3 MO-XJ p74基因的擴(kuò)增、克隆及測序鑒定
    1.4 p74基因及其編碼蛋白質(zhì)生物信息學(xué)分析
    1.5 P74蛋白氨基酸序列同源性及遺傳進(jìn)化分析
    1.6 p74基因編碼蛋白羧基端抗原集中區(qū)的擴(kuò)增、克隆及鑒定
    1.7 原核表達(dá)載體構(gòu)建
    1.8 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及Western blot分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 p74基因的擴(kuò)增、克隆及測序鑒定
    2.2 p74基因核苷酸及編碼氨基酸序列分析
    2.3 P74蛋白氨基酸序列同源性及遺傳進(jìn)化分析結(jié)果
    2.4 p74基因編碼蛋白羧基端抗原集中區(qū)的擴(kuò)增、克隆及鑒定結(jié)果
    2.5 重組表達(dá)載體p ET-32a (+) -p74C構(gòu)建與鑒定結(jié)果
    2.6 P74C蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果
    2.7 表達(dá)產(chǎn)物Western blot鑒定結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]綿羊肺炎支原體膜蛋白p56基因的克隆、表達(dá)及反應(yīng)原性研究[J]. 陳誠,喬軍,孟慶玲,劉田莉,胡政香,馬玉,才學(xué)鵬,陳創(chuàng)夫.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2016(02)
[2]綿羊肺炎支原體p128基因序列分析及原核表達(dá)[J]. 馮旭飛,刀筱芳,張賢宇,李定霏,楊發(fā)龍.  中國獸醫(yī)雜志. 2015(02)
[3]綿羊肺炎支原體貴州分離株的鑒定[J]. 張雙翔,程振濤,周碧君,文明,王開功,李澤民,王慧,崔亞蘭,覃嵐,夏鵬.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(05)
[4]中國部分地區(qū)綿羊肺炎支原體的基因多態(tài)性分析[J]. 許健,儲岳峰,趙萍,高鵬程,賀英,剡根強(qiáng),逯忠新.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(09)
[5]綿羊肺炎支原體兩分離株的藥物敏感實(shí)驗(yàn)[J]. 陳宏偉,剡根強(qiáng),張秀萍.  石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(02)
[6]外源基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)[J]. 廖美德,謝秋玲,林劍,洪岸,孫奮勇.  生命科學(xué). 2002(05)
[7]一種由支原體感染的綿羊增生性間質(zhì)性肺炎的研究[J]. 胡景韶,蔣學(xué)良,胡誠隆,張道永.  中國獸醫(yī)雜志. 1982(05)

碩士論文
[1]綿羊肺炎支原體新疆塔城流行株的分離鑒定及油佐劑滅活苗免疫原性初步研究[D]. 胡政香.石河子大學(xué) 2015
[2]綿羊肺炎支原體多表位疫苗的研究及免疫試驗(yàn)[D]. 張軒.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號：3438166