南極是人類(lèi)共有的資源寶庫(kù),含有多種礦物質(zhì)資源的同時(shí)也蘊(yùn)含著豐富的生物資源。南極地區(qū)生存環(huán)境惡劣,低溫、酷寒、高鹽、晝夜溫差大、紫外輻射強(qiáng)等因素使得該地區(qū)大型生物種類(lèi)單一,但微生物獨(dú)特的生理特性及代謝機(jī)制使得其能夠在南極地區(qū)大量生存、繁衍,對(duì)該地區(qū)微生物進(jìn)行研究,不但可以發(fā)掘許多未知的微生物種群,豐富微生物基因庫(kù),還可以獲得多種功能獨(dú)特的生物活性物質(zhì)。本文以產(chǎn)褐藻膠裂解酶的南極真菌Aspergillus sp.22-5為研究對(duì)象,采用基因工程技術(shù)克隆獲得褐藻膠裂解酶基因（Aly-i7）并進(jìn)行異源表達(dá),純化并研究了重組褐藻膠裂解酶（Aly-i7）的酶學(xué)性質(zhì),同時(shí)對(duì)其降解產(chǎn)物在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用潛力進(jìn)行了初步探索,為酶法降解褐藻膠以及褐藻寡糖在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。本文利用褐藻酸鈉為唯一碳源培養(yǎng)基,對(duì)南大洋沉積物樣品中的菌落進(jìn)行了選擇性培養(yǎng)和篩選,共分離獲得10株具有褐藻膠降解能力的真菌,種屬鑒定表明,其中有紅酵母屬（Rhodotorula sp.）4株,青霉菌屬（Penicillium sp.）3株,曲霉屬（Aspergillus sp.）3株。本文以酶活力最高的曲霉菌Aspergill... 

【文章來(lái)源】：青島科技大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 褐藻膠
        1.1.1 褐藻膠簡(jiǎn)介
        1.1.2 褐藻膠的應(yīng)用
    1.2 褐藻寡糖
        1.2.1 褐藻寡糖簡(jiǎn)介
        1.2.2 褐藻寡糖的制備方法
        1.2.3 褐藻寡糖的生物活性
        1.2.4 褐藻寡糖的純化
    1.3 褐藻膠裂解酶
        1.3.1 褐藻膠裂解酶簡(jiǎn)介
        1.3.2 褐藻膠裂解酶的來(lái)源
        1.3.3 褐藻膠裂解酶的分類(lèi)
        1.3.4 褐藻膠裂解酶的活性測(cè)定方法
        1.3.5 褐藻膠裂解酶的應(yīng)用
    1.4 本研究的意義
第2章 南極真菌產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株的篩選與鑒定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料來(lái)源
        2.1.2 主要試劑及配制
        2.1.3 培養(yǎng)基及成分
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株的篩選
        2.1.6 褐藻膠裂解酶活力測(cè)定
        2.1.7 褐藻膠裂解酶活性菌株的種屬鑒定
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 初篩及復(fù)篩結(jié)果
        2.2.2 DNS法測(cè)定褐藻膠酶活結(jié)果
        2.2.3 褐藻膠裂解酶菌株的種屬鑒定結(jié)果
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第3章 南極真菌褐藻膠裂解酶基因的克隆及表達(dá)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 試驗(yàn)用緩沖液配制
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 SDS-PAGE電泳
        3.1.5 工程菌的構(gòu)建
        3.1.6 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
        3.1.7 誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 褐藻膠裂解酶基因Aly-i7的序列分析
        3.2.2 南極真菌藻膠裂解酶基因Aly-i7的克隆
        3.2.3 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        3.2.4 重組酶的誘導(dǎo)表達(dá)與蛋白純化
        3.2.5 重組酶的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第4章 重組褐藻膠裂解酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 出發(fā)菌株與培養(yǎng)基
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 底物選擇性
        4.2.2 溫度對(duì)褐藻膠裂解酶Aly-i7的影響
        4.2.3 pH對(duì)褐藻膠裂解酶Aly-i7的影響
        4.2.4 不同金屬離子對(duì)Aly-i7的酶活力影響
        4.2.5 Aly-i7的酶解產(chǎn)物分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 Aly-i7的底物選擇性
        4.3.2 Aly-i7最適反應(yīng)溫度
        4.3.3 Aly-i7的熱穩(wěn)定性
        4.3.4 Aly-i7最適pH
        4.3.5 Aly-i7的pH穩(wěn)定性
        4.3.6 金屬離子對(duì)Aly-i7的酶活力影響
        4.3.7 Aly-i7的產(chǎn)物分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 褐藻寡糖對(duì)黃瓜白粉病的防治效果研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 菌種與培養(yǎng)基
        5.1.2 主要試劑和材料
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 褐藻寡糖的制備及藥劑配制
        5.2.2 褐藻寡糖對(duì)黃瓜白粉病菌的毒力測(cè)定
        5.2.3 褐藻寡糖防治黃瓜白粉病的盆栽實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 褐藻寡糖的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果
        5.3.2 5%褐藻寡糖對(duì)黃瓜白粉病的盆栽防效實(shí)驗(yàn)
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]褐藻膠裂解酶的基因克隆及表達(dá)條件優(yōu)化[J]. 許超,黃桂媛,王巧貞,盧明倩,張榮燦,廖威,張?jiān)崎_(kāi),黃庶識(shí).  中國(guó)釀造. 2017(12)
[2]褐藻制備生物乙醇的生產(chǎn)優(yōu)化研究[J]. 郗欣彤,毛紹名.  中國(guó)生物工程雜志. 2017(12)
[3]高效褐藻膠降解菌的篩選與產(chǎn)酶條件優(yōu)化[J]. 李婷婷,陳倩,石萍,耿旭.  北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(06)
[4]南極普里茲灣海綿共附生放線菌的分離及其次級(jí)代謝潛力評(píng)估[J]. 官穎穎,于雪,張海雷,張寧,李靜.  中國(guó)海洋藥物. 2017(05)
[5]產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株HB12274的鑒定和發(fā)酵優(yōu)化[J]. 高王宇,黃惠琴,劉敏,朱軍,鮑時(shí)翔.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(10)
[6]一株明亮發(fā)光桿菌產(chǎn)褐藻膠裂解酶的培養(yǎng)基優(yōu)化[J]. 劉彩琴,王楠,陳薇青,金建昌,項(xiàng)麗艷.  食品工業(yè)科技. 2017(08)
[7]褐藻膠裂解酶基因的克隆表達(dá)及重組酶酶學(xué)性質(zhì)[J]. 韓偉,林娟,謝勇,徐凡,葉秀云.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(05)
[8]基于高通量測(cè)序的冷凍南極磷蝦中細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析[J]. 江艷華,姚琳,李風(fēng)鈴,郭瑩瑩,朱文嘉,王聯(lián)珠.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2016(07)
[9]微泡菌屬ALW5褐藻膠裂解酶的酶學(xué)性質(zhì)及酶解產(chǎn)物的抗氧化活性[J]. 吳麗云,倪輝,李鶴賓,肖安風(fēng),蔡慧農(nóng),朱艷冰.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2016(06)
[10]一株轉(zhuǎn)化瓊膠為新瓊寡糖菌株的篩選及鑒定[J]. 韓軍萍,黃雅燕,葉靜,肖美添.  微生物學(xué)報(bào). 2015(09)

碩士論文
[1]云南部分溫泉嗜熱微生物的多樣性及嗜熱酶的研究[D]. 楊越.云南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3434326