真核生物的基因組DNA通過高度濃縮以染色質(zhì)的形式存在于細胞核內(nèi),染色質(zhì)高度緊縮的結構會抑制轉(zhuǎn)錄因子和RNA聚合酶的結合,因此,基因上特定位點的核小體需要經(jīng)過重塑以促進DNA與其他因子的結合,從而在細胞發(fā)育和響應外界信號的過程中能有效地激活基因的表達。將常規(guī)組蛋白替換為組蛋白變體以及組蛋白尾部氨基酸殘基的翻譯后修飾是調(diào)控染色質(zhì)可塑性的兩種途徑。H2A.Z屬于組蛋白H2A的一類變體,它的氨基酸序列雖然在不同種類的真核生物中保守性極高,但是,在同類生物中與常規(guī)組蛋白H2A氨基酸序列的相似性比較低,這暗示H2A.Z在調(diào)控基因表達和維持基因組穩(wěn)定性方面具有特殊的功能。在真核生物基因轉(zhuǎn)錄過程中,H2A.Z交換到染色質(zhì)上需要染色質(zhì)重塑復合體SWR1的介導。近期的研究顯示,H2AZ參與調(diào)控可誘導基因的表達,但是具體機制仍然不明確。本項研究深入探討了粗糙脈孢菌中H2A.Z調(diào)控cat-3基因表達的分子機制。在脈孢菌中,cat-3基因能夠被體內(nèi)或者體外造成的氧化脅迫誘導表達。H2A.Z在其他高等生物中屬于必需基因,將其敲除會導致死亡。但是,在粗糙脈孢菌中H2A.Z的缺失不會致死。本研究發(fā)現(xiàn),H2A.Z是ca... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
縮略詞
第一章 引言
    1.1 表觀遺傳學概述
    1.2 組蛋白變體簡介
    1.3 組蛋白變體H2A.Z簡介
    1.4 染色質(zhì)重塑復合體SWR1介導H2A.Z交換到核小體上
    1.5 活性氧分子的穩(wěn)態(tài)與維持對生物體生存的意義
    1.6 本課題的研究目的和意義
第二章 研究方法
    2.1 菌株
    2.2 培養(yǎng)基及試劑
    2.3 表達載體及轉(zhuǎn)化菌株的構建
    2.4 GST標簽融合蛋白的誘導表達和純化
    2.5 多克隆抗體的制備
    2.6 粗糙脈孢菌基因缺失突變株的構建
    2.7 粗糙脈孢菌子囊孢子的萌發(fā)
    2.8 粗糙脈孢菌可溶性蛋白的提取
    2.9 SDS-PAGE和Western blot免疫印跡
    2.10 粗糙脈孢菌RNA的提取
    2.11 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
    2.12 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)
    2.13 熒光定量PCR分析(qPCR)
    2.14 競爭性生長管實驗(Race tube)檢測菌絲的生長速率及H_2O_2抗性
    2.15 過氧化氫酶活性膠內(nèi)分析法(In-gel assay)
第三章 組蛋白變體H2A.Z調(diào)控cat-3基因轉(zhuǎn)錄的機制
    3.1 H2A.Z~(KO)菌株具有較強的H202相對抗性表型
    3.2 H2A.Z抑制cat-3基因的表達
    3.3 H2A.Z募集在cat-3基因區(qū)域和cat-3基因上游異染色質(zhì)的邊界區(qū)域
    3.4 SWR1復合體通過將H2A.Z交換到cat-3基因區(qū)域抑制cat-3基因的轉(zhuǎn)錄
    3.5 H2A.Z的缺失導致轉(zhuǎn)錄激活因子CPC1在cat-3基因區(qū)域的募集量增加
    3.6 氧化脅迫時H2A.Z從核小體上解離促進cat-3基因的大量表達
    3.7 H2A.Z可能通過影響染色質(zhì)的局部環(huán)境調(diào)控其附近基因的表達
    3.8 小結與討論
第四章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3434105