中藥防己是防己科植物粉防己（Stephania tetrandra S.Moore）的干燥根,在我國具有悠久的藥用歷史�，F(xiàn)代研究表明,防己的活性成分為粉防己堿,具有抗塵肺、抗高血壓、抗炎、抗腫瘤等藥理作用。但隨著需求的增長和野生資源的破壞性挖掘,逐漸出現(xiàn)粉防己價格上漲、供不應(yīng)求的局面。粉防己堿屬于芐基異喹啉類生物堿。目前,包括嗎啡在內(nèi)的多種芐基異喹啉類生物堿的生物合成途徑已經(jīng)得到完全解析并實現(xiàn)了工程化生產(chǎn),但粉防己堿等雙芐基異喹啉類生物堿的生物合成仍然鮮有報道。為了實現(xiàn)粉防己堿生物合成途徑的完全解析及粉防己堿的異源生產(chǎn),本研究對粉防己進行了轉(zhuǎn)錄組測序,并通過代謝組和轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合分析獲得了一系列可能參與粉防己堿生物合成的功能基因;在BIAs生物合成上游途徑中,6OMT是一個關(guān)鍵酶,所以本研究對獲得的St6OMTs基因進行克隆和異源表達,并通過體外酶促反應(yīng)驗證了基因功能。主要研究內(nèi)容如下:1.比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析篩選粉防己堿生物合成途徑候選功能基因?qū)Ψ鄯兰焊�、根、莖、葉四個組織部位進行相關(guān)生物堿相對含量測定,發(fā)現(xiàn)相關(guān)生物堿在地下部分的含量遠高于地上部分。接著采用二代聯(lián)合三代測序技術(shù)對以上四個組... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

推測的粉防己堿生物合成途徑本研究驗證功能的6OMT用紅色標出

粉防己堿生物合成途徑候選功能基因篩選及去甲烏藥堿-6-O-甲基轉(zhuǎn)移酶功能研究8圖1.2BIA途徑中涉及細胞色素P450的主要酶促反應(yīng)[76]結(jié)構(gòu)式中灰色部分為反應(yīng)位點。Fig.1.2ThemainenzymaticreactionsbyCYPsinvolvedintheBIAbiosynthesispathway[76]Thereactionintheformulaishighlightedbythegreyshading.幾十年來，研究人員已深入探索了BIA生物合成途徑，發(fā)現(xiàn)了眾多關(guān)鍵酶，但仍然不能排除還有其他途徑未被闡明，包括一些被公認為是自發(fā)反應(yīng)的步驟，實際上也可能存在酶催化現(xiàn)象。例如，在嗎啡途徑中，人們原來認為(7S)-salutaridinol7-O-acetate生成

粉防己堿生物合成途徑候選功能基因篩選及去甲烏藥堿-6-O-甲基轉(zhuǎn)移酶功能研究20圖2.1粉防己不同組織部位生物堿的相對含量數(shù)據(jù)來源于3個獨立的生物學(xué)重復(fù)實驗，并進行顯著性分析。*表示與莖相比p<0.05**表示與莖相比p<0.01。#表示與葉相比p<0.05##表示與葉相比p<0.01。Fig.2.1TherelativecontentofalkaloidsindifferenttissuesofS.tetrandra.Thedatarepresentmeans±SDofthreeindependentbiologicalsamples.Differencewerescoredasstatisticalsignificance.*indicatesp<0.05**indicatesp<0.01comparedwithstemgroup.#indicatesp<0.05##indicatesp<0.01comparedwithleafgroup.3.2粉防己總RNA提取及檢測基于相關(guān)化合物在不同組織部位的相對含量不同，推測參與這些化合物生物合成的功能基因在不同組織部位中的表達水平也存在差異，所以本研究繼續(xù)對粉防己根皮、根、莖、葉四個部位進行轉(zhuǎn)錄組測序。采用試劑盒的方法提取粉防己根皮、根、莖、葉等四個組織部位的總RNA，隨后進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果如圖2.2所示，電泳圖中未見明顯基因組條帶。經(jīng)超微量紫外分光光度計檢測，總RNA濃度及純度如表2.2所示。以上結(jié)果說明所提取的總RNA完整性、濃度、純度較好，滿足轉(zhuǎn)錄組測序及逆轉(zhuǎn)錄要求。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3430175