發(fā)布時間：2021-10-11 08:30

　　蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）是一種新資源食品,蛋白含量高,氨基酸種類齊全。然而,必需氨基酸中含硫氨基酸（甲硫氨酸+半胱氨酸）含量較低。因此,提高含硫氨基酸含量有助于改善蛋白核小球藻蛋白品質(zhì)和開發(fā)蛋白及必需氨基酸營養(yǎng)均衡的優(yōu)質(zhì)微藻食品。籽粒莧（Amaranthus hypochondriacus L.）是一年生糧、飼、菜兼用型作物,種子蛋白質(zhì)含量高、營養(yǎng)豐富。源于籽粒莧成熟種子的AMA1蛋白營養(yǎng)均衡,富含8種人體必需氨基酸,且未現(xiàn)人體過敏反應(yīng),是一種優(yōu)質(zhì)貯藏蛋白。本文從籽粒莧發(fā)育種子分離編碼優(yōu)質(zhì)貯藏蛋白的AhAMA1基因,檢測其時空表達譜。應(yīng)用生物信息學(xué)工具系統(tǒng)分析AhAMA1蛋白理化特性及系統(tǒng)進化。構(gòu)建AhAMA1基因植物組成型表達載體,通過基因槍法對蛋白核小球藻進行遺傳轉(zhuǎn)化,以期篩選培育蛋白質(zhì)和必需氨基酸含量高且均衡的蛋白核小球藻優(yōu)質(zhì)株系。此外,采用農(nóng)桿菌（Agrobacterium）介導(dǎo)滲透侵染法在本氏煙草（Nicotiana benthamiana）葉組織瞬時表達AhAMA1,檢測其對煙葉組織蛋白質(zhì)、油脂、淀粉含量等生理生化性狀的影響,以評估AhAM... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

籽粒莧幼苗、種子、RNA和AhAMA1表達Figure2.1A.hypochondriacusseedling,developingseedsandAhAMA1expressionA：盆栽籽粒莧幼苗（A:SeedlingofA.hypochondriacusgrowninpot）

-12-2.3.2AhAMA1基因ORF克隆以籽粒莧（cv.SX-04）發(fā)育種子RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板，用分別帶有XbaI和SmaI酶切位點的目的基因引物進行高保真PCR，擴增AhAMA1基因ORF。擴增的靶基因片段（AhAMA1，915bp）與GFP（720bp）基因連接后經(jīng)XbaI和SmaI雙酶切后電泳檢測結(jié)果如圖2.2所示，PCR擴增的條帶與預(yù)期目的基因條帶（1635bp）相符。PCR擴增產(chǎn)物序列測序結(jié)果與AhAMA1基因開放閱讀框序列完全一致。2.3.3AhAMA1基因植物組成型表達載體的構(gòu)建對XbaI和SmaI雙酶切后的AhAMA1-GFP和pBI121表達載體進行連接獲得重組質(zhì)粒。再用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)DH5α，獲得陽性菌落。提取質(zhì)粒，用XbaI和SmaI進行雙酶切鑒定（圖2.2）以及DNA測序。如圖2.2所示，AhAMA1基因ORF-GFP正確的亞克隆到pBI121載體的多克隆位點，獲得了AhAMA1基因植物組成型表達載體AhAMA1-GFP-pBI121（圖2.3，表達載體簡示圖，示意RB-LB）。圖2.2酶切鑒定重組質(zhì)粒AhAMA1-GFP-pBI121Figure2.2EnzymedigestionidentificationofrecombinantplasmidAhAMA1-GFP-pBI121注：M1、M2：DANmarker；1：pBI121載體；2：AhAMA1-GFP；3：AhAMA1-GFP-pBI121重組質(zhì)粒；4：XbaI和SmaI雙酶切的重組質(zhì)粒AhAMA1-GFP-pBI121。Note:M1、M2:DANmarker;1:pBI121vector;2:AhAMA1-GFP;3:AhAMA1-GFP-pBI121recombinantplasmid;4:XbaIandSmaIdouble-digestedrecombinantplasmidAhAMA1-GFP-pBI121圖2.3AhAMA1-GFP-pBI121植物組成型表達載體簡示圖Figure2.3SchematicdiagramofplantconstitutiveexpressionvectorAhAMA1-GFP-pBI121

-16-圖2.5農(nóng)桿菌侵染煙草葉組織、AhAMA1基因表達和蛋白、油脂及淀粉含量檢測Figure2.5Agrobacteriuminfection,AhAMA1geneexpression,andcontentsofprotein,oilandstarchinN.benthamianaleaftissues.A：農(nóng)桿菌侵染后煙草葉片；B：煙葉中NbActin和AhAMA1基因相對表達量；C：煙葉中AhAMA1基因表達RT-PCR檢測；D：煙葉蛋白、油脂和淀粉含量測定。A:N.benthamianaleafinfectedbyAgrobacterium;B:RelativeexpressionofNbActinandAhAMA1genesinthetobaccoleaves;C:DetectionofAhAMA1geneexpressionintobaccoleavesbyRT-PCR;D:Determinationofprotein,oilandstarchcontentsinthetabaccoleaves.M：Marker；1：GV3101-AMA1-GFP-pBI121侵染后煙葉；2：GV3101-pBI121侵染煙葉；3：野生型煙葉。M:Marker;1:GV3101-AMA1-GFP-pBI121infestedtobaccoleaf;2:GV3101-pBI121infestedtobaccoleaf;3:Wild-typetobaccoleaf.

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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[5]氮源對紫球藻生理的影響及紫球藻蛋白酶的初步研究[D]. 沙沙.山東大學(xué) 2012
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本文編號：3430161