植物甜蛋白是從植物種分離提取到的植物蛋白,由于甜蛋白甜度高、熱量低、比合成甜味劑安全,不會導(dǎo)致肥胖、安全無毒等優(yōu)點^[1],使得甜蛋白作為新型甜味劑,廣受青睞。本研究主要目的是探索MabinlinⅡ甜蛋白在原核生物中的表達以及檢測表達的蛋白的甜味。野生馬檳榔植株主要分布在云南和廣西等熱帶和亞熱帶地區(qū),由于地理氣候等自然原因,馬檳榔植株數(shù)量稀少,瀕危滅絕。本研究預(yù)期借助大腸桿菌表達載體,表達優(yōu)化過的MabinlinⅡ甜蛋白基因,探究甜蛋白是否能大量表達。為MabinlinⅡ甜蛋白的開發(fā)提供一些理論基礎(chǔ)。目前MabinlinⅡ甜蛋白基因已經(jīng)能夠在大腸桿菌中表達,為了進一步提高表達量以及測定其甜味活性,在NCBI查詢得到MabinlinⅡ甜蛋白基因全長序列,依據(jù)大腸桿菌對密碼子的利用率不同,將稀有密碼子置換為常用密碼子,對468 bp長度的轉(zhuǎn)座酶密碼子進行了優(yōu)化。本研究目的則是使用pET28a（+）作為克隆表達載體,E.coli BL21（DE3）作為表達菌,表達出密碼子優(yōu)化后的468 bp長度MabinlinⅡPlus甜蛋白基因和去掉序列中編碼氨基酸的信號肽、N-端肽,... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MabinlinII和密碼子優(yōu)化后MabinlinIIPlus的序列比對Fig.1-1SequencealignmentofMabinlinIIandMabinlinIIPlusaftercodonoptimization

區(qū)間(0.8-1.0)，GC 含量為 58.55%，達到了 GC 值理想?yún)^(qū)間(30%-70%)，提高了子利用率[46]。終止密碼子 TAG 被替換為 TAA。MabinlinII Plus 與 Mabinlin列比較圖 1-1，合成的 MabinlinII Plus 的長度和結(jié)構(gòu)如圖 1-2 所示。圖 1-1 MabinlinII 和密碼子優(yōu)化后 MabinlinII Plus 的序列比對Fig.1-1 Sequence alignment of MabinlinII and MabinlinII Plus after codon optimization

圖 1-3 MabinlinII(AB)和密碼子優(yōu)化后 MabinlinII(AB) Plus 的序列比對Fig. 1-3 Sequence alignment of MabinlinII (AB) and MabinlinII (AB) Plus after codon optimization圖 1-4 MabinlinⅡ(AB) Plus 氨基酸序列結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1-4 Schematic diagram of the amino acid sequence of MabinlinII (AB) Plus2.3.2 目的片段 MabinlinII Plus 的獲得根據(jù)質(zhì)粒 pUC57-simple-MabinlinII Plus 中包括的 XhoI 和 BamHI 酶切位點，這兩種內(nèi)切酶對質(zhì)粒pUC57-simple-MabinlinIIPlus。電泳檢測結(jié)果如圖1-5所示。中片段 MabinlinII Plus 的正確大小為 474 bp，使用回收電泳對片段進行回收。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]甜味蛋白特性及其表達的研究進展[J]. 何明娟,鄒曙明,蔣霞云,劉寧.  生物化工. 2018(05)
[2]甜味蛋白Monellin及其基因工程[J]. 趙萌,蔡成固,劉波.  中國調(diào)味品. 2018(07)
[3]甜味蛋白Brazzein及其基因工程[J]. 鄭偉偉,趙萌,劉波.  中國調(diào)味品. 2018(03)
[4]電子舌工作原理及應(yīng)用綜述[J]. 王棟軒,衛(wèi)雪嬌,劉紅蕾.  化工設(shè)計通訊. 2018(02)
[5]人造甜味劑對健康的影響[J]. 涂全.  心血管病防治知識(科普版). 2018(02)
[6]金魚Tgf2轉(zhuǎn)座酶的原核表達及其DNA結(jié)合活性[J]. 司蕊蕊,趙茜,盧夢琪,鄒曙明,蔣霞云.  上海海洋大學學報. 2017(03)
[7]電子舌技術(shù)在真假伊力老陳酒鑒別中的應(yīng)用[J]. 巴特爾達賴,王錫昌,吳娜,李莉,劉新宇.  食品工業(yè)科技. 2017(09)
[8]湖北孝感和四川成都地區(qū)來源的酒曲對米酒滋味品質(zhì)影響的評價[J]. 王玉榮,張俊英,胡欣潔,蔡宏宇,楊成聰,郭壯.  食品科學. 2015(16)
[9]蔗糖水溶液標準物質(zhì)的研制[J]. 劉新,王愛萍,龔維,姚旭霞,張坤,劉霞.  山東化工. 2015(13)
[10]甜味蛋白Brazzein在乳酸乳球菌的表面表達及鑒定[J]. 王長遠,劉祎婷,張麗萍,姚笛.  中國食品學報. 2015(05)

碩士論文
[1]Marker-free轉(zhuǎn)基因番茄表達外源植物甜蛋白ThaumatinⅡ[D]. 楊飛.浙江師范大學 2010
[2]奇異果甜蛋白thaumatin基因二價載體在玉米中的共表達及其在酵母中的表達[D]. 潘寧.首都師范大學 2005



本文編號：3430370