MYB轉錄因子是植物中最大的一類轉錄因子之一,在調控植物生長和逆境脅迫響應中發(fā)揮著重要作用。本研究在白樺高鹽脅迫下轉錄組分析中獲得一個差異表達基因,命名為BpMYB108。BpMYB108屬于R2R3類MYB轉錄因子,通過對其表達特性分析發(fā)現(xiàn),BpMYB108基因可能與植物應答逆境脅迫相關,進一步研究了BpMYB108基因在提高擬南芥抗旱、耐鹽性的功能,主要研究結果如下:1.構建BpMYB108基因與GFP標簽蛋白相融合載體,利用基因槍技術瞬時轉化洋蔥表皮細胞后在激光共聚焦顯微鏡下觀察,結果表明BpMYB108蛋白定位在細胞核上。2.利用實時熒光定量PCR技術,對BpMYB108基因在不同組織中以及不同脅迫處理后在根組織中的時空表達進行了分析,結果顯示,BpMYB108基因在白樺根、莖、葉組織中均有表達,其中在莖中表達量最高,而且BpMYB108基因在高鹽、干旱及ABA脅迫處理后均上調表達,表明BpMYB108參與白樺對不同脅迫產(chǎn)生的應答反應。3.利用PCR技術克隆獲得BpMYB108基因上游1622bp的啟動子片段,序列分析表明,該區(qū)域含有多個逆境響應、激素響應等相關順式作用元件。通... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１不同脅迫處理下辦ＭＫＳ／ＯＳ基因在白樺根中的表達量??設定Ｏｈ時的倍數(shù)為１，由圖（２－１）可以看出：在經(jīng)過ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００和ＡＢＡ脅迫??處理后，白樺財基因在白樺根組織中均出現(xiàn)不同程度的上調表達

?東北林業(yè)大學碩士學位論文????達到最低點；在ＡＢＡ脅迫下，相對表達量同樣是先隨著時間變化逐漸降低，在１２ｈ時??達到極低點，之后轉為升高，在２４ｈ時達到最高點，之后又逐漸降低，但在４８ｈ時出現(xiàn)??了一個極低值，之后又逐漸升高，在７２ｈ時達到了一個相對高點。由以上結果可以得??知，白樺辦仳基因在逆境脅迫處理下表達量上調，說明白樺ｇｐＭＫＳｉ㈨基因參與??白樺對逆境脅迫的應答反應。??２．３．２白樺辦卵融合ＧＦＰ蛋白標簽表達載體的構建??２．３．２．１仳基因全長的獲得??以白樺ｃＤＮＡ為模板，擴增帶有酶切位點的辦仰基因全長，結果如圖（２－??２）所示：成功擴増出目的片段。??」４??１０００ｂ”．??圖２－２辦私基因目的片段全長??（Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１：?仰目的片段?ＰＣＲ?產(chǎn)物）??２．３．２．２?ｐＢＩＵｌ－＾ＢｐＭＦＢＭＳ－ｅＧＦＰ?載體的構建??提�。穑拢桑保膊罚拢穑停伲拢保埃福澹牵疲写竽c桿菌的質粒，分別用ＰＢＩ１２１載體上游引物、基??因下游引物和基因上游引物、載體下游引物進行ＰＣＲ檢測，結果如圖（２－３）所示：己??成功構建表達載體。??ｌＯＯＯｂｐ?＾￣Ｉ??圖?２－３?ｐＢＩ１２１－５ｐＭＴ５ｉ０５－ｅＧＦＰ?載體檢測??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：載體上游引物與基因下游引物ＰＣＲ產(chǎn)物；２：基因上游引物與載體下??游引物ＰＣＲ產(chǎn)物）??２＿３．２．３?ｐＢＩ１２１?卻Ａｆｍ？似－ｅＧＦＰ?載體酶切觀??利用限制性內(nèi)切酶Ｉ和Ｓｗａ?Ｉ對ｐＢＩ?１２１？辦財－ｅＧＦＰ載體進行雙酶切驗??－１６．??

?２白樺辦Ｍｒａ／財基因功能研究???證，結果如圖（２－４）所示：成功切下條帶。??■??５０００ｂｐ?＾￣￣??圖２－４融合載體酶切電泳檢測??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ５０００；?１：?ｐＢＩ１２１?酶切前質粒：２：?ｐＢＩ１２１?酶切后質粒）??將驗證后的重組質粒進行農(nóng)桿菌ＥＨＡ１０５的轉化及農(nóng)桿菌菌液ＰＣＲ檢測，將檢??測正確的單克隆菌液保菌備用。??２＿３．３?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亞細胞定位??以ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ質粒為對照，將ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ裝入鎢粉中，通過基因槍??法轟擊洋蔥表皮細胞，通過激光共聚焦顯微鏡觀察熒光情況。（如圖２－５）??ＧＦＰ?Ｂｒｉｇｈｔ?Ｍｅｒｇｅｄ??ｅＧＦＰ?餘＇■養(yǎng)轉撼??ＢｐＭＹＢ１０８－ＧＦＰ??圖２－５?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亞細胞定位??從圖中可以看出：ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ在細胞核與細胞膜中均有ＧＦＰ綠色熒光分布，而??ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ只在細胞核中有綠色熒光分布。實驗結果說明ＢｐＭＹＢ１０８蛋??白定位于細胞核中。??２．３．４白樺５／７Ｍｙｇ２卵基因的生物信息學分析??２．３．４．１?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的理化性質及保守結構域預測??仳基因的編碼區(qū)（ＯＲＦ）為９６３ｂｐ，編碼一個含３２０個氨基酸殘基的蛋??白。利用ＥｘＰＡＳｙ在線軟件分析辦＿／財基因編碼的氨基酸序列，可知該蛋白分子式??－１７－??

【參考文獻】：
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