MYB轉(zhuǎn)錄因子是植物中最大的一類轉(zhuǎn)錄因子之一,在調(diào)控植物生長(zhǎng)和逆境脅迫響應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。本研究在白樺高鹽脅迫下轉(zhuǎn)錄組分析中獲得一個(gè)差異表達(dá)基因,命名為BpMYB108。BpMYB108屬于R2R3類MYB轉(zhuǎn)錄因子,通過(guò)對(duì)其表達(dá)特性分析發(fā)現(xiàn),BpMYB108基因可能與植物應(yīng)答逆境脅迫相關(guān),進(jìn)一步研究了BpMYB108基因在提高擬南芥抗旱、耐鹽性的功能,主要研究結(jié)果如下:1.構(gòu)建BpMYB108基因與GFP標(biāo)簽蛋白相融合載體,利用基因槍技術(shù)瞬時(shí)轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞后在激光共聚焦顯微鏡下觀察,結(jié)果表明BpMYB108蛋白定位在細(xì)胞核上。2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),對(duì)BpMYB108基因在不同組織中以及不同脅迫處理后在根組織中的時(shí)空表達(dá)進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示,BpMYB108基因在白樺根、莖、葉組織中均有表達(dá),其中在莖中表達(dá)量最高,而且BpMYB108基因在高鹽、干旱及ABA脅迫處理后均上調(diào)表達(dá),表明BpMYB108參與白樺對(duì)不同脅迫產(chǎn)生的應(yīng)答反應(yīng)。3.利用PCR技術(shù)克隆獲得BpMYB108基因上游1622bp的啟動(dòng)子片段,序列分析表明,該區(qū)域含有多個(gè)逆境響應(yīng)、激素響應(yīng)等相關(guān)順式作用元件。通... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１不同脅迫處理下辦ＭＫＳ／ＯＳ基因在白樺根中的表達(dá)量??設(shè)定Ｏｈ時(shí)的倍數(shù)為１，由圖（２－１）可以看出：在經(jīng)過(guò)ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００和ＡＢＡ脅迫??處理后，白樺財(cái)基因在白樺根組織中均出現(xiàn)不同程度的上調(diào)表達(dá)

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文????達(dá)到最低點(diǎn)；在ＡＢＡ脅迫下，相對(duì)表達(dá)量同樣是先隨著時(shí)間變化逐漸降低，在１２ｈ時(shí)??達(dá)到極低點(diǎn)，之后轉(zhuǎn)為升高，在２４ｈ時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，之后又逐漸降低，但在４８ｈ時(shí)出現(xiàn)??了一個(gè)極低值，之后又逐漸升高，在７２ｈ時(shí)達(dá)到了一個(gè)相對(duì)高點(diǎn)。由以上結(jié)果可以得??知，白樺辦仳基因在逆境脅迫處理下表達(dá)量上調(diào)，說(shuō)明白樺ｇｐＭＫＳｉ㈨基因參與??白樺對(duì)逆境脅迫的應(yīng)答反應(yīng)。??２．３．２白樺辦卵融合ＧＦＰ蛋白標(biāo)簽表達(dá)載體的構(gòu)建??２．３．２．１仳基因全長(zhǎng)的獲得??以白樺ｃＤＮＡ為模板，擴(kuò)增帶有酶切位點(diǎn)的辦仰基因全長(zhǎng)，結(jié)果如圖（２－??２）所示：成功擴(kuò)増出目的片段。??」４??１０００ｂ”．??圖２－２辦私基因目的片段全長(zhǎng)??（Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１：?仰目的片段?ＰＣＲ?產(chǎn)物）??２．３．２．２?ｐＢＩＵｌ－＾ＢｐＭＦＢＭＳ－ｅＧＦＰ?載體的構(gòu)建??提�。穑拢桑保膊罚拢穑停伲拢保埃福澹牵疲写竽c桿菌的質(zhì)粒，分別用ＰＢＩ１２１載體上游引物、基??因下游引物和基因上游引物、載體下游引物進(jìn)行ＰＣＲ檢測(cè)，結(jié)果如圖（２－３）所示：己??成功構(gòu)建表達(dá)載體。??ｌＯＯＯｂｐ?＾￣Ｉ??圖?２－３?ｐＢＩ１２１－５ｐＭＴ５ｉ０５－ｅＧＦＰ?載體檢測(cè)??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：載體上游引物與基因下游引物ＰＣＲ產(chǎn)物；２：基因上游引物與載體下??游引物ＰＣＲ產(chǎn)物）??２＿３．２．３?ｐＢＩ１２１?卻Ａｆｍ？似－ｅＧＦＰ?載體酶切觀??利用限制性內(nèi)切酶Ｉ和Ｓｗａ?Ｉ對(duì)ｐＢＩ?１２１？辦財(cái)－ｅＧＦＰ載體進(jìn)行雙酶切驗(yàn)??－１６．??

?２白樺辦Ｍｒａ／財(cái)基因功能研究???證，結(jié)果如圖（２－４）所示：成功切下條帶。??■??５０００ｂｐ?＾￣￣??圖２－４融合載體酶切電泳檢測(cè)??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ５０００；?１：?ｐＢＩ１２１?酶切前質(zhì)粒：２：?ｐＢＩ１２１?酶切后質(zhì)粒）??將驗(yàn)證后的重組質(zhì)粒進(jìn)行農(nóng)桿菌ＥＨＡ１０５的轉(zhuǎn)化及農(nóng)桿菌菌液ＰＣＲ檢測(cè)，將檢??測(cè)正確的單克隆菌液保菌備用。??２＿３．３?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亞細(xì)胞定位??以ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ質(zhì)粒為對(duì)照，將ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ裝入鎢粉中，通過(guò)基因槍??法轟擊洋蔥表皮細(xì)胞，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察熒光情況。（如圖２－５）??ＧＦＰ?Ｂｒｉｇｈｔ?Ｍｅｒｇｅｄ??ｅＧＦＰ?餘＇■養(yǎng)轉(zhuǎn)撼??ＢｐＭＹＢ１０８－ＧＦＰ??圖２－５?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亞細(xì)胞定位??從圖中可以看出：ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ在細(xì)胞核與細(xì)胞膜中均有ＧＦＰ綠色熒光分布，而??ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ只在細(xì)胞核中有綠色熒光分布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明ＢｐＭＹＢ１０８蛋??白定位于細(xì)胞核中。??２．３．４白樺５／７Ｍｙｇ２卵基因的生物信息學(xué)分析??２．３．４．１?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的理化性質(zhì)及保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)??仳基因的編碼區(qū)（ＯＲＦ）為９６３ｂｐ，編碼一個(gè)含３２０個(gè)氨基酸殘基的蛋??白。利用ＥｘＰＡＳｙ在線軟件分析辦＿／財(cái)基因編碼的氨基酸序列，可知該蛋白分子式??－１７－??

【參考文獻(xiàn)】：
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