目的:肺癌發(fā)病率及死亡率在全球呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。肺癌以發(fā)現(xiàn)晚,生存期短為特征。雖然積極的手術(shù)治療及靶向藥物的發(fā)展在一定程度上改善了患者的無(wú)病生存期及5年生存率,但是提高并不明顯。Rac3（ras-related C3 botulinum toxin substrate 3）在多種惡性腫瘤中調(diào)控細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、侵襲遷移等惡性行為。本課題組在前期研究中對(duì)Rac3在肺腺癌中的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè),對(duì)肺癌細(xì)胞凋亡、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移進(jìn)行了觀察,并探討了其作用機(jī)制,自噬是細(xì)胞程序化死亡的最重要因素之一,也是細(xì)胞自我更新的機(jī)制之一,對(duì)其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行探討是肺癌研究的重要方向。本研究擬觀察Rac3對(duì)肺腺癌細(xì)胞自噬的影響,進(jìn)一步深入研究其調(diào)控機(jī)制,目的在于為進(jìn)一步深入研究Rac3在肺腺癌惡性行為中的調(diào)控機(jī)制提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù),為肺癌診斷及預(yù)后評(píng)估提供新的分子標(biāo)志物,為未來(lái)治療提供新的靶向候選基因。研究方法:1.以Western blot及qRT-PCR檢測(cè)Rac3在四株肺腺癌細(xì)胞株（A549、H1975、H358、NH-1299）中表達(dá)。2.對(duì)A549細(xì)胞給予轉(zhuǎn)染LV-Rac3-RNAi敲減Rac3,H129... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot及qRT-PCR檢測(cè)Rac3在肺腺癌細(xì)胞株中表達(dá)A.Rac3蛋白在四株肺腺癌細(xì)胞中表達(dá)，B.Rac3mRNA在四株肺腺癌細(xì)胞中表達(dá)

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文113.2LV-Rac3-RNAi及pCMV-Rac3轉(zhuǎn)染NH-1299細(xì)胞，檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率3.2.1LV-Rac3-RNAi轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞在Rac3表達(dá)高的A549細(xì)胞給予轉(zhuǎn)染LV-Rac3-RNAi敲減Rac3表達(dá)，分別以免疫熒光、Westernblot及qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，免疫熒光顯示，轉(zhuǎn)染72h后，熒光顯微鏡下觀察，轉(zhuǎn)染效率約為90%，見(jiàn)圖3.2.1A。Westernblot及qRT-PCR檢測(cè)顯示，Rac3蛋白及mRNA敲減后表達(dá)降低約80%（P＜0.001），圖3.2.1B、C。圖3.2.1LV-Rac3-RNAi轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率A.免疫熒光檢測(cè)LV-Rac3-RNAi轉(zhuǎn)染效率，B.Westernblot驗(yàn)證敲減后Rac3在蛋白水平表達(dá)，C.qRT-PCR驗(yàn)證敲減后Rac3在mRNA水平表達(dá),(與siNC比較，***P＜0.001)。

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文123.2.2pCMV-Rac3轉(zhuǎn)染NH-1299細(xì)胞在Rac3表達(dá)低的H1299細(xì)胞給予轉(zhuǎn)染pCMV-Rac3上調(diào)Rac3表達(dá)，分別以免疫熒光、Westernblot及qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，免疫熒光顯示，轉(zhuǎn)染72h后，熒光顯微鏡下觀察，轉(zhuǎn)染效率約為90%，見(jiàn)圖3.2.2A。Westernblot及qRT-PCR檢測(cè)顯示，Rac3蛋白及mRNA敲減后表達(dá)升高約10倍（P＜0.001），圖3.2.2B、C。圖3.2.2pCMV-Rac3轉(zhuǎn)染NH-1299細(xì)胞，檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率A.免疫熒光檢測(cè)pCMV-Rac3轉(zhuǎn)染效率，B.Westernblot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染Rac3在蛋白水平表達(dá)，C.qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后Rac3在mRNA水平表達(dá)，(與Vector比較，***P＜0.001)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Feedback regulation between phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate dependent Rac exchange factor 1 and transforming growth factor β1 and prognostic value in gastric cancer[J]. Qi Shao,Zhi-Ming Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2020(01)

碩士論文
[1]Rac3在肺腺癌中調(diào)控ERK信號(hào)通路的分子機(jī)制研究[D]. 李精漢.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]Rac3與E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其臨床相關(guān)性研究[D]. 祖鵬.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3400084