目的本研究旨在探討沉默ERCC1基因后順鉑、紫杉醇、培美曲塞單藥或者聯(lián)合用藥作用對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞產(chǎn)生的影響。方法利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù),比較肺鱗癌和肺腺癌與其對(duì)應(yīng)的癌旁組織中ERCC1基因的表達(dá)水平。使用RT-PCR技術(shù)篩選ERCC1高表達(dá)肺癌細(xì)胞株。構(gòu)建ERCC1 siRNA慢病毒載體LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2,并將其轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞。Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中ERCC1的蛋白表達(dá)水平,確認(rèn)轉(zhuǎn)染是否成功。為了確定ERCC1基因的表達(dá)與細(xì)胞對(duì)順鉑,紫杉醇和培美曲塞的藥物敏感性之間的關(guān)系。將化療藥物順鉑,紫杉醇和培美曲塞采用單獨(dú)用藥或者聯(lián)合用藥分別處理轉(zhuǎn)染慢病毒的A549細(xì)胞,并使用CCK法和集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞存活率和細(xì)胞集落形成能力。結(jié)果1本研究分析了TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中535例肺腺癌和59例對(duì)應(yīng)的癌旁組織中ERCC1的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),ERCC1基因在肺腺癌組織中的表達(dá)水平（中位數(shù)為2082）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其在癌旁組織中的表達(dá)水平（中位數(shù)為1274）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-4.901,P=0.001）。ERCC1基因在肺鱗癌組織（5... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RNAi慢病毒載體圖譜

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文。取 200μl 第 5 步中配制的細(xì)胞裂解液加入到第 4 步 EP 管中待裂解的到冰上。拿起 EP 管用手輕輕彈起底部細(xì)胞，此過(guò)程共 20min，每過(guò) 2-3m，然后再放到冰上，如此重復(fù)。14000 RCF，溫度設(shè)定 4℃，時(shí)間為 5min 離心，將上清液吸出到新A 法測(cè)蛋白質(zhì)濃度使用 BCA 蛋白測(cè)定試劑盒，按說(shuō)明書(shū)的步驟，提取 ERCC1 的蛋白制標(biāo)準(zhǔn)曲線如（圖2），最后得到蛋白質(zhì)濃度。

癌組織 1477 2082 28290.001組織 1145 1274 1971癌組織 2193 3004 40420.100組織 2138 2721 3361位數(shù)癌細(xì)胞株 ERCC1 基因的表達(dá) A549、NCI-H23 和 NCI-H2030 三個(gè)細(xì)胞系測(cè)定其中 ERCC1 的表達(dá)進(jìn)行了半定量 PCR，結(jié)果顯示，ERCC1 在 NCI-H23 和 NCI-H2030 細(xì)表達(dá)，而在 A549 細(xì)胞中呈高表達(dá)。ERCC1 mRNA 在 A549、NCI-H2-H23 細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量分別為 0.16±0.017、0.037±0.01 和 0.026±0.00CC1 mRNA 在三組細(xì)胞系中相對(duì)表達(dá)量，NCI-H23 組和 NCI-H2030 組顯著性（P=0.288），A549 組與 NCI-H23 組和 NCI-H2030 組之間均存異（P=0.001，P=0.001）（圖 3）。因此，我們選擇 A549 細(xì)胞進(jìn)行后

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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