磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PHT1家族是介導(dǎo)植物磷素吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)分配的重要基因家族。從第3代杉木優(yōu)良無性系洋061中克隆獲得1個(gè)杉木磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ClPht1;2,并對不同程度磷脅迫下ClPht1;2的時(shí)空表達(dá)進(jìn)行分析,為了解杉木磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因結(jié)構(gòu)和功能表達(dá)奠定基礎(chǔ)。以轉(zhuǎn)錄組測序獲得的ClPht1;2核心序列為基礎(chǔ),以杉木洋061無性系根系cDNA克隆為模板,利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆目的基因的全長,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),檢測了杉木洋061無性系在不同組織中ClPht1;2的表達(dá),以及磷饑餓誘導(dǎo)3、10、25 d下ClPht1;2在根中的表達(dá)量變化。克隆得到1個(gè)杉木PHT1家族基因ClPht1;2（GeneBank登錄號:MK450598）。ClPht1;2編碼氨基酸序列與日本柳杉磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族基因編碼氨基酸序列相似性為93%,與馬尾松、油茶、毛果楊等植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族基因的編碼氨基酸序列比對,結(jié)果相似性均>72%。ClPht1;2基因序列編碼區(qū)長1 565 bp,編碼511個(gè)氨基酸,蛋白理論分子量60.024 ku,為疏水蛋白,不具有信號肽,潛在磷酸化位點(diǎn)42個(gè)。ClPht... 

【文章來源】：西北林學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,35(05)北大核心CSCD

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ClPht1;2及部分植物PHT基因編碼蛋白的氨基酸序列多重比對

ClPht1;2最長開放閱讀框1 565 bp,該基因的預(yù)測編碼蛋白的分子式為C2757H4217N697O746S30,分子量60.024 ku,不穩(wěn)定系數(shù)為36.69,預(yù)測是穩(wěn)定蛋白分子,蛋白脂肪系數(shù)89.35,預(yù)測理論等電點(diǎn)8.70。ClPHT1;2的預(yù)測編碼蛋白有511個(gè)氨基酸,其中Ala(A)12.7%,Gly(G)8.9%,Ile(I)6.5%,Leu(L)8.5%,Phe(F)8.0%,Ser(S) 5.6%,Thr(T)6.2%,Val(V)6.2%,其他氨基酸含量都<5%,Pyl(O)和Sec(U)為0。編碼氨基酸中酸性氨基酸39個(gè),堿性氨基酸54個(gè),負(fù)電荷殘基總數(shù)39,正電荷殘基總數(shù)45。ClPht1;2編碼蛋白總平均親水性系數(shù)0.350,含有親水性和疏水性氨基酸,親水性系數(shù)最小值在第397位(-2.900),最大值在第496位處(3.333),且疏水區(qū)域多于親水區(qū)域,表明其為疏水性蛋白(圖2)。使用SignalP 4.1預(yù)測ClPht1;2蛋白信號肽,圖3可見該蛋白第1-36位氨基酸的平均S值為0.105,D值為0.120,遠(yuǎn)小于默認(rèn)D-cutoff值0.5,表明該編碼蛋白不具有信號肽,不是分泌型蛋白。

使用SignalP 4.1預(yù)測ClPht1;2蛋白信號肽,圖3可見該蛋白第1-36位氨基酸的平均S值為0.105,D值為0.120,遠(yuǎn)小于默認(rèn)D-cutoff值0.5,表明該編碼蛋白不具有信號肽,不是分泌型蛋白。使用NetPhos 3.1預(yù)測ClPht1;2的潛在磷酸化位點(diǎn),圖4表明該蛋白擁有可能的17個(gè)絲氨酸(Ser)、19個(gè)蘇氨酸(Thr)、6個(gè)酪氨酸(Tyr)磷酸修飾位點(diǎn)。

【參考文獻(xiàn)】：
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