本文關(guān)鍵詞：辣椒SBP-box基因家族分析及CaSBP11和CaSBP12基因功能的鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：辣椒(Capsicum annuum L.)是一種具有極高經(jīng)濟價值的重要蔬菜作物,在全世界范圍內(nèi)廣泛栽培。然而,辣椒的病蟲害卻日益嚴(yán)重。尤其是由土傳病害辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)侵染引起的辣椒疫病(Phytophthora blight),對辣椒產(chǎn)業(yè)化發(fā)展已經(jīng)形成了制約。防治疫病發(fā)生的方法雖然很多,但效果并不是很好,有的還造成了很大的副作用。因此,利用分子生物技術(shù)開展抗疫病基因的尋找與抗性機理的研究具有很重要的意義。而SBP-box基因家族是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子家族。廣泛地參與到植物的代謝調(diào)控、生長發(fā)育以及對逆境的脅迫響應(yīng),如激素應(yīng)答、果實、花和孢子發(fā)育、以及抗病原菌侵染等。然而,SBP-box基因家族在辣椒中的功能并不清楚。除此之外,本研究從實驗室前期所建立的辣椒對不同親合型疫霉菌生理小種的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中也篩選出一個辣椒SBP-box差異表達基因(CaSBP05)。因此對辣椒SBP-box基因家族進行了分析,并對兩個差異表達基因CaSBP11和CaSBP12進行了功能鑒定,旨在為探尋辣椒對疫霉菌的抗性機理提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.對辣椒SBP-box家族基因進行了生物信息學(xué)分析。在辣椒中鑒定了15個SBP-box基因,分布在7條染色體上。序列分析表明這個基因家族成員含有76個氨基酸左右的保守結(jié)構(gòu)域,具有C3H、C2HC型的兩個辛指結(jié)構(gòu)和一個核定位信號,進化樹分析表明辣椒SBP-box家族基因可被分為6組,其中辣椒SBP-box基因與雙子葉植物的進化關(guān)系較近。除此之外,同源性分析表明,辣椒基因組中有4對同源基因,而辣椒與擬南芥基因組中有10對同源基因。2.分析了辣椒SBP-box家族基因的組織表達特性。結(jié)果表明:辣椒SBP-box基因在各組織中的表達模式可分為兩類,一類是組成型表達,一類是差異表達。并且,組成型表達的基因在各檢測組織中的表達量都較低。總的來說,辣椒SBP-box基因在葉中的表達量最高,莖和根次之,果和花最低。3.對辣椒SBP-box基因進行了辣椒疫霉菌與效應(yīng)劑處理下的表達模式分析。結(jié)果表明:7個辣椒SBP-box基因(CaSBP01、02、04、05、06、11、12和13)在親和與非親和疫霉菌的侵染下呈現(xiàn)上調(diào)表達模式,而5個(CaSBP07、09、10、14和15)CaSBP基因呈下調(diào)表達模式。CaSBP03和CaSBP08兩個基因在親和疫霉菌侵染下呈上調(diào)表達模式,在非親和疫霉菌侵染下呈下調(diào)表達模式。SA與MeJA生物合成相應(yīng)的抑制劑(PBZ和SHAM)處理表明,辣椒SBP-box基因在抑制劑處理6h時,基因的表達量達到最低,用相應(yīng)的誘導(dǎo)劑(SA、MeJA)處理后發(fā)現(xiàn),基因的表達量有所上升,但MeJA處理后峰值出現(xiàn)的比SA處理后的早。4.利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)技術(shù)對接種疫霉菌后篩選出的兩個差異表達基因CaSBP11與CaSBP12進行了功能的初步鑒定。CaSBP11與CaSBP12基因沉默植株的表型與陰性對照植株相比沒有明顯的差異,且沉默效率達到60%;對沉默的植株進行離體葉片的抗病檢測結(jié)果顯示,沉默植株的抗病性增強,根系活力增強,說明CaSBP11與CaSBP12基因在辣椒對辣椒疫病的抗性過程中可能起負(fù)向調(diào)控的作用。另外,對沉默植株的鹽脅迫表明,其在鹽脅迫過程中可能起正向調(diào)控的作用。
【關(guān)鍵詞】：辣椒 SBP-box家族基因 疫霉菌 VIGS 基因功能鑒定
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S641.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 文獻綜述11-15
• 1.1 辣椒疫病的危害與防治11
• 1.1.1 辣椒疫病的危害11
• 1.1.2 辣椒疫病的防治11
• 1.2 辣椒對疫病的抗性遺傳規(guī)律及抗病基因的研究進展11-12
• 1.2.1 抗性遺傳規(guī)律11-12
• 1.2.2 抗病基因的研究進展12
• 1.3 SBP-box基因家族的研究進展12-13
• 1.3.1 SBP-box基因家族的起源與發(fā)展12-13
• 1.3.2 SBP轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征13
• 1.3.3 SBP轉(zhuǎn)錄因子在逆境脅迫中的作用13
• 1.4 本研究的目的意義及主要研究內(nèi)容13-15
• 1.4.1 目的意義13-14
• 1.4.2 研究內(nèi)容14-15
• 第二章 辣椒SBP-box家族基因的鑒定與分析15-28
• 2.1 試驗材料15
• 2.2 試驗方法15-16
• 2.2.1 辣椒SBP-box家族基因的鑒定與注釋15
• 2.2.2 辣椒SBP-box家族基因序列比對、進化樹及外顯子內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分析15
• 2.2.3 辣椒SBP-box基因家族染色體定位及同源性分析15-16
• 2.2.4 植株培養(yǎng)、疫霉菌接種與外源物質(zhì)處理16
• 2.2.5 RNA提取和RT-PCR16
• 2.3 結(jié)果與分析16-26
• 2.3.1 辣椒SBP-box家族基因的鑒定與注釋16-17
• 2.3.2 辣椒SBP-box家族基因序列比對、進化樹及外顯子內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分析17-20
• 2.3.3 辣椒SBP-box基因家族染色體定位及同源性分析20-23
• 2.3.4 辣椒SBP-box基因的組織特異性表達分析23
• 2.3.5 辣椒SBP-box基因在疫霉菌侵染和抑制劑處理下的表達模式分析23-26
• 2.4 討論26-28
• 第三章 辣椒CaSBP11基因功能的初步研究28-37
• 3.1 試驗材料28
• 3.1.1 植物材料與辣椒疫霉菌菌株28
• 3.1.2 試驗載體28
• 3.1.3 酶及主要試劑28
• 3.2 試驗方法28-29
• 3.2.1 非生物脅迫處理28
• 3.2.2 RNA提取和RT-PCR28
• 3.2.3 病毒載體的構(gòu)建28-29
• 3.2.4 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化29
• 3.2.5 農(nóng)桿菌侵染29
• 3.2.6 辣椒植株沉默效率檢測以及抗病性鑒定29
• 3.2.7 辣椒沉默植株耐鹽性鑒定29
• 3.3 結(jié)果與分析29-35
• 3.3.1 非生物脅迫處理下的表達模式分析29-30
• 3.3.2 辣椒植株沉默效率的檢測及抗病性鑒定30-34
• 3.3.3 CaSBP11基因沉默植株的耐鹽性鑒定34-35
• 3.4 討論35-37
• 第四章 辣椒CaSBP12基因功能的初步研究37-45
• 4.1 試驗材料37
• 4.1.1 植物材料與辣椒疫霉菌菌株37
• 4.1.2 試驗載體37
• 4.1.3 酶及主要試劑37
• 4.2 試驗方法37
• 4.3 結(jié)果與分析37-43
• 4.3.1 CaSBP12在非生物脅迫處理下的表達模式分析37-38
• 4.3.2 辣椒植株沉默效率的檢測及抗病性鑒定38-42
• 4.3.3 沉默植株的耐鹽性鑒定42-43
• 4.4 討論43-45
• 第五章 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-51
• 附錄51-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳雪;袁金鐸;趙楠楠;楊桂文;安利國;;渦蟲的基因沉默作用[J];生物技術(shù)通報;2013年03期

2 孫國鳳;導(dǎo)入耐過氧化氫蘭草基因促進植物生長[J];生物技術(shù)通報;1999年05期

3 葉愛華,吳延軍,楊莉;基因沉默及其克服策略[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2003年01期

4 佟玲;侯杰;崔國新;許志茹;李玉花;;基因沉默在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用及其相關(guān)因子的研究進展[J];植物生理學(xué)報;2011年07期

5 李飛;吳益東;韓召軍;;害蟲的基因沉默控制[J];昆蟲知識;2010年05期

6 萬小榮;莫愛瓊;楊妙賢;余土元;;植物基因沉默機制研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年17期

7 丁錦平;;棉花病毒誘導(dǎo)基因沉默體系構(gòu)建[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年06期

8 劉忠慧;儲明星;陳國宏;;促性腺激素釋放激素基因及其受體基因的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2006年03期

9 趙先海;黃浩;鄧小梅;袁金英;湛欣;;對一種多基因組裝方法的改進[J];中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2014年03期

10 李成,張濱麗,李杰;RNAi技術(shù)的研究進展和發(fā)展前景[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁誠;李萃;馬金;韓成貴;于嘉林;Andrew Jackson;李大偉;;大麥條紋花葉病毒誘導(dǎo)的基因沉默載體系統(tǒng)的改造及其應(yīng)用[A];中國植物病理學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

2 陳翔;;RNAi:從科學(xué)家的剪九到醫(yī)師的治療手段[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

3 施定基;張文俊;鄧元告;冉亮;康瑞娟;趙興貴;張越南;;藻類基因工程的一些進展[A];中國海洋生化學(xué)術(shù)會議論文薈萃集[C];2005年

4 王海光;李自超;;植物干旱脅迫應(yīng)答基因及其產(chǎn)物研究進展[A];2003年全國作物遺傳育種學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2003年

5 陳愛葵;李梅紅;;RNAi—基因沉默[A];遺傳學(xué)進步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

6 項曉瓊;;RNAi技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用[A];中國藥理學(xué)會毒理專業(yè)委員會第十次學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

7 劉家云;郝曉柯;李慶霞;馬龍洋;溫偉紅;賈林濤;楊安鋼;;靶向X區(qū)的siRNA抑制HBV基因的表達和復(fù)制[A];第九屆西北五省（區(qū)）檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

8 焦鋒;樓程富;;基因在植物多倍體中的進化研究進展[A];中國蠶學(xué)會第三屆青年學(xué)術(shù)研討會暨浙江省第二屆青年學(xué)術(shù)論壇——蠶桑分論壇論文集（上冊）[C];2001年

9 吳麗娟;陳偉;康格非;蔣建新;朱佩芳;;鋅指蛋白A20基因沉默載體研究與初步應(yīng)用[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 徐新云;毛侃瑯;毛吉炎;;CYP3A4基因沉默和高表達對三氯乙烯致肝細胞毒性的影響[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 Esha Dey Pallavi Ail 編譯 碩軍;“基因沉默”先導(dǎo)者[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

2 南方日報記者 張勝波　林亞茗 通訊員 粵科宣;“廣東是成果產(chǎn)業(yè)化好地方”[N];南方日報;2011年

3 記者 李荔;朱冰：環(huán)境也可以改變基因[N];北京科技報;2012年

4 記者 毛黎;科學(xué)家成功解開大量基因沉默之謎[N];科技日報;2008年

5 醫(yī)學(xué)博士 科學(xué)松鼠會成員 致樺;美麗的干擾[N];中國經(jīng)營報;2010年

6 紀(jì)光偉;2006,最出彩的是基因[N];健康報;2006年

7 張?zhí)锟?基因編輯器被寄予厚望[N];中國醫(yī)藥報;2014年

8 張?zhí)锟?垃圾DNA并非垃圾[N];文匯報;2012年

9 記者　許琦敏;基因“梁祝悲劇”誘發(fā)血癌[N];文匯報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張興坦;煙草MAPK基因的功能研究[D];重慶大學(xué);2015年

2 Chabungbam Orville Singh（奧維爾）;家蠶BmPLA2和BmRab3基因的分子克隆、表達和功能研究[D];浙江大學(xué);2014年

3 張彥蘋;桃microRNA的識別及其與靶基因的作用模式分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 張燕萍;青蝦性別相關(guān)基因的篩選、克隆及時空表達分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 穆春;棉花耐鹽基因篩選及酪氨酸蛋白磷酸酶基因功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 蘇思遠;組織蛋白酶D基因沉默誘導(dǎo)HeLa細胞老化的機制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2016年

7 張凌娣;同源序列高劑量異常表達及病毒編碼蛋白對基因沉默的作用[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 袁佐清;東亞三角渦蟲DjPreb和DjStag基因表達與功能分析[D];中國海洋大學(xué);2010年

9 邱慶明;若干生精細胞相關(guān)基因功能初步研究[D];中南大學(xué);2009年

10 陳婷;果蠅中染色體乙�；c去乙�；揎椉捌渑c熱休克基因表達的關(guān)系[D];東北師范大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉炎霖;水茄（Solanum torvum）StUBCc基因的克隆及功能初步分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 劉凱;棉花抗黃萎病相關(guān)基因GhSKIP35基因的克隆與功能驗證[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 任夢飛;靈芝細胞懸浮培養(yǎng)中高表達靈芝鯊烯合酶基因提高靈芝酸單體的生產(chǎn)[D];昆明理工大學(xué);2015年

4 梁甜;白樺OSC新基因的克隆、RNAi載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化初步研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

5 劉春娟;84K楊HDA903基因的克隆與功能分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

6 胡亞平;Peroxiredoxin Ⅰ基因沉默對TGF-β1誘導(dǎo)的成纖維細胞增殖及膠原合成影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 蘇靜芬;慢病毒介導(dǎo)恒河猴P53和P21基因沉默的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

8 王素艷;殘緣璃眼蜱subolesin和半胱氨酸蛋白酶基因生物學(xué)功能初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 向婷;滲透壓脅迫下AM真菌Rhizophagus irregularis HOG1基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 宋雪;利用CRISPR/Cas9和TALENs技術(shù)敲除斑馬魚Vap、C1H7orf55、mri1、BX284640.3和dscr6基因[D];山東大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：辣椒SBP-box基因家族分析及CaSBP11和CaSBP12基因功能的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：339125