發(fā)布時間：2021-09-05 21:35

　　蘋果在我國水果產(chǎn)業(yè)中占據(jù)重要地位,但在其生長過程中不可避免的受到干旱和鹽脅迫等逆境因素的影響。據(jù)報道,bZIP家族轉(zhuǎn)錄因子與非生物脅迫密切相關(guān)。課題組前期已對蘋果MdbZIP26基因進行初步功能研究,結(jié)果表明該基因可能通過ABA介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來提高植物對干旱和鹽脅迫的抗性。為了進一步闡明MdbZIP26基因的功能以及對非生物脅迫的響應(yīng)機制。本文對MdbZIP26基因進行亞細胞定位和自激活活性驗證,對其轉(zhuǎn)錄后潛在的磷酸化修飾位點進行預(yù)測分析。利用實時定量PCR法分析MdbZIP26的組織表達模式。同時,從富士蘋果葉片中分離MdbZIP26基因啟動子,將其與pCanbia1391Z-GUS載體連接后遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥植株,進一步分析MdbZIP26在時間和空間上的表達模式。此外,利用生物信息學(xué)技術(shù)分析MdbZIP26啟動子區(qū)的順式作用元件,并對MdbZIP26啟動子進行缺失表達分析。獲得的主要結(jié)果如下:1、MdbZIP26亞細胞定位結(jié)果表明MdbZIP26定位于細胞核中。酵母自激活活性驗證結(jié)果顯示MdbZIP26具有轉(zhuǎn)錄自激活活性,但其自激活活性能夠被200ng/ml的AbA抑制。說明Md... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MdbZIP26亞細胞定位分析

圖3-3 MdbZIP26自激活載體構(gòu)建A，1: 1296bp 的 MdbZIP26克隆片段, M: 2000bp marker ；B，1: p GBKT7原質(zhì)粒,2:EcoRI/BamHI雙酶切p GBKT7, M: 15000bp marker；C，1: EcoRI/BamHI雙酶切p GEM-T-MdbZIP26；D，1-8： 含MdbZIP26–BD的大腸桿菌的菌液PCR鑒定Figure 3-3 MdbZIP26 self-activation vector constructionA, 1296 bp fragment of MdbZIP26, M: 2000 bp marker; B,1: pGBKT7 original plasmid, 2:EcoRI/BamHI double digestion pGBKT7, M: 15000 bp marker; C,1: EcoRI/BamHI double digestion pGEM-T-MdbZIP26–BD; D, 1-8: PCR results of E. coli containing MdbZIP26–BD3.2.2 MdbZIP26 基因自激活活性鑒定將兩個已知具有互作關(guān)系的 pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 分別轉(zhuǎn)化于酵母 Y2H和 Y187，并共同涂于含有 SD-Leu-Trp 和 SD-Leu-Trp / x-α-gal / AbA 的培養(yǎng)皿中，其結(jié)果如圖3-4所示，pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 具有互作關(guān)系在 SD-Leu-Trp/x-α-ga / AbA 的平板上生長的菌落顯示藍色，其對 AbA 具有抗性，說明載體的功能正�？捎糜谧约せ顚嶒�。之后，對 MdbZIP26 的自激活活性進行驗證，將重組后的 pGBKT7

圖3-4 MdbZIP26 酵母自激活活性分析Figure 3-4 Analysis of yeast self-activation activity of MdbZIP263.3 MdbZIP26 基因轉(zhuǎn)錄后潛在磷酸化位點預(yù)測之前研究表明 bZIP 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化修飾，對其活性激活以及功能都起很大的作用。對此，根據(jù)已知的 bZIP 同源基因的磷酸化位點，通過與擬南芥 AREB1、AREB2、AREB3、番茄 SlABRE 和大豆 GmAREB 進行氨基酸序列比對，對 MdbZIP26 潛在的磷酸化位點進行預(yù)測。結(jié)果如圖3-5所示，在 MdbZIP26 中，除 bZIP 結(jié)構(gòu)域外，還含有四個保守結(jié)構(gòu)域 C1、C2、C3和C4。這些保守結(jié)構(gòu)域中含有可能被絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶磷酸化的靶序列。不同的激酶和識別修飾不同的位點，如共有的序列R / KXXS/T可能是鈣依賴蛋白激酶磷酸化的作用位點，RyXXSyT 可能被酪蛋白激酶II磷酸化，SyTXKyT 可能被蛋白激酶C磷酸化，KyRXXXSyT 可能被環(huán)鳥甘酸依賴蛋白激酶磷酸化等。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]干旱對植物影響的研究進展[J]. 王靜,康林玉,劉周斌,呂俊恒,劉宇華,鄒學(xué)校.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(07)
[2]植物誘導(dǎo)型啟動子研究進展[J]. 孫芳芳,宋洪元.  南方園藝. 2014(02)
[3]高等植物轉(zhuǎn)錄因子研究進展[J]. 陳霞,羅世巧,段翠芳,曾日中.  安徽農(nóng)學(xué)通報. 2008(09)
[4]植物基因在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控及其生物學(xué)意義[J]. 張椿雨,龍艷,馮吉,孟金陵.  遺傳. 2007(07)
[5]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 陳麗.  植物生理學(xué)通訊. 1997(06)

博士論文
[1]蘋果MdMYB88和MdMYB124轉(zhuǎn)錄因子在低溫和干旱脅迫中的作用機理研究[D]. 謝銀鵬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[2]茶樹bZIP家族基因的非生物脅迫響應(yīng)及C亞家族CsbZIP6和CsbZIP4的功能初步分析[D]. 曹紅利.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]蘋果HMGR基因家族啟動子的克隆及功能分析[D]. 呂東梅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子TGA7參與植物響應(yīng)干旱脅迫的機制研究[D]. 吳娟娟.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]蘋果轉(zhuǎn)錄因子MdbZIP26基因的抗逆功能研究[D]. 王雅瓊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018



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