發(fā)布時(shí)間：2021-09-05 21:35

　　蘋(píng)果在我國(guó)水果產(chǎn)業(yè)中占據(jù)重要地位,但在其生長(zhǎng)過(guò)程中不可避免的受到干旱和鹽脅迫等逆境因素的影響。據(jù)報(bào)道,bZIP家族轉(zhuǎn)錄因子與非生物脅迫密切相關(guān)。課題組前期已對(duì)蘋(píng)果MdbZIP26基因進(jìn)行初步功能研究,結(jié)果表明該基因可能通過(guò)ABA介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)提高植物對(duì)干旱和鹽脅迫的抗性。為了進(jìn)一步闡明MdbZIP26基因的功能以及對(duì)非生物脅迫的響應(yīng)機(jī)制。本文對(duì)MdbZIP26基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位和自激活活性驗(yàn)證,對(duì)其轉(zhuǎn)錄后潛在的磷酸化修飾位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。利用實(shí)時(shí)定量PCR法分析MdbZIP26的組織表達(dá)模式。同時(shí),從富士蘋(píng)果葉片中分離MdbZIP26基因啟動(dòng)子,將其與pCanbia1391Z-GUS載體連接后遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥植株,進(jìn)一步分析MdbZIP26在時(shí)間和空間上的表達(dá)模式。此外,利用生物信息學(xué)技術(shù)分析MdbZIP26啟動(dòng)子區(qū)的順式作用元件,并對(duì)MdbZIP26啟動(dòng)子進(jìn)行缺失表達(dá)分析。獲得的主要結(jié)果如下:1、MdbZIP26亞細(xì)胞定位結(jié)果表明MdbZIP26定位于細(xì)胞核中。酵母自激活活性驗(yàn)證結(jié)果顯示MdbZIP26具有轉(zhuǎn)錄自激活活性,但其自激活活性能夠被200ng/ml的AbA抑制。說(shuō)明Md... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MdbZIP26亞細(xì)胞定位分析

圖3-3 MdbZIP26自激活載體構(gòu)建A，1: 1296bp 的 MdbZIP26克隆片段, M: 2000bp marker ；B，1: p GBKT7原質(zhì)粒,2:EcoRI/BamHI雙酶切p GBKT7, M: 15000bp marker；C，1: EcoRI/BamHI雙酶切p GEM-T-MdbZIP26；D，1-8： 含MdbZIP26–BD的大腸桿菌的菌液PCR鑒定Figure 3-3 MdbZIP26 self-activation vector constructionA, 1296 bp fragment of MdbZIP26, M: 2000 bp marker; B,1: pGBKT7 original plasmid, 2:EcoRI/BamHI double digestion pGBKT7, M: 15000 bp marker; C,1: EcoRI/BamHI double digestion pGEM-T-MdbZIP26–BD; D, 1-8: PCR results of E. coli containing MdbZIP26–BD3.2.2 MdbZIP26 基因自激活活性鑒定將兩個(gè)已知具有互作關(guān)系的 pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 分別轉(zhuǎn)化于酵母 Y2H和 Y187，并共同涂于含有 SD-Leu-Trp 和 SD-Leu-Trp / x-α-gal / AbA 的培養(yǎng)皿中，其結(jié)果如圖3-4所示，pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 具有互作關(guān)系在 SD-Leu-Trp/x-α-ga / AbA 的平板上生長(zhǎng)的菌落顯示藍(lán)色，其對(duì) AbA 具有抗性，說(shuō)明載體的功能正�？捎糜谧约せ顚�(shí)驗(yàn)。之后，對(duì) MdbZIP26 的自激活活性進(jìn)行驗(yàn)證，將重組后的 pGBKT7

圖3-4 MdbZIP26 酵母自激活活性分析Figure 3-4 Analysis of yeast self-activation activity of MdbZIP263.3 MdbZIP26 基因轉(zhuǎn)錄后潛在磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)之前研究表明 bZIP 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化修飾，對(duì)其活性激活以及功能都起很大的作用。對(duì)此，根據(jù)已知的 bZIP 同源基因的磷酸化位點(diǎn)，通過(guò)與擬南芥 AREB1、AREB2、AREB3、番茄 SlABRE 和大豆 GmAREB 進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)，對(duì) MdbZIP26 潛在的磷酸化位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果如圖3-5所示，在 MdbZIP26 中，除 bZIP 結(jié)構(gòu)域外，還含有四個(gè)保守結(jié)構(gòu)域 C1、C2、C3和C4。這些保守結(jié)構(gòu)域中含有可能被絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶磷酸化的靶序列。不同的激酶和識(shí)別修飾不同的位點(diǎn)，如共有的序列R / KXXS/T可能是鈣依賴蛋白激酶磷酸化的作用位點(diǎn)，RyXXSyT 可能被酪蛋白激酶II磷酸化，SyTXKyT 可能被蛋白激酶C磷酸化，KyRXXXSyT 可能被環(huán)鳥(niǎo)甘酸依賴蛋白激酶磷酸化等。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干旱對(duì)植物影響的研究進(jìn)展[J]. 王靜,康林玉,劉周斌,呂俊恒,劉宇華,鄒學(xué)校.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(07)
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[5]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 陳麗.  植物生理學(xué)通訊. 1997(06)

博士論文
[1]蘋(píng)果MdMYB88和MdMYB124轉(zhuǎn)錄因子在低溫和干旱脅迫中的作用機(jī)理研究[D]. 謝銀鵬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[2]茶樹(shù)bZIP家族基因的非生物脅迫響應(yīng)及C亞家族CsbZIP6和CsbZIP4的功能初步分析[D]. 曹紅利.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]蘋(píng)果HMGR基因家族啟動(dòng)子的克隆及功能分析[D]. 呂東梅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子TGA7參與植物響應(yīng)干旱脅迫的機(jī)制研究[D]. 吳娟娟.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]蘋(píng)果轉(zhuǎn)錄因子MdbZIP26基因的抗逆功能研究[D]. 王雅瓊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018



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