發(fā)布時間：2021-09-04 09:41

　　桃小食心蟲是我國北方果樹生產(chǎn)中危害最為嚴(yán)重的害蟲之一,以鉆蛀果實內(nèi)部縱橫串食為害,嚴(yán)重影響果實的產(chǎn)量和品質(zhì),給果農(nóng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。目前主要以化學(xué)農(nóng)藥等措施來控制其為害,但這種方法會造成越來越嚴(yán)重的3R（Residue,Resistance,Resurgence）問題。目前利用昆蟲的行為策略對桃小食心蟲的種群密度進行控制是研究的熱點之一,性誘劑是其中的主要產(chǎn)品,其主要成分是性信息素。在桃小食心蟲寄主搜尋、選擇和定位的過程中,嗅覺發(fā)揮重要的作用。信息素能引發(fā)桃小食心蟲多種行為反應(yīng),而其對信息素的反應(yīng)又受到寄主植物釋放的氣味調(diào)節(jié),寄主揮發(fā)物和信息素的結(jié)合使用能夠有效提高引誘劑的效果,有研究表明,化學(xué)感受蛋白（CSPs）能夠結(jié)合并運輸氣味分子。對桃小食心蟲化學(xué)感受蛋白（CSPs）基因的克隆及功能的驗證有助于深入理解桃小食心蟲化學(xué)感受的分子機制,也為利用信息素和氣味分子調(diào)節(jié)桃小食心蟲的危害范圍和種群密度提供理論依據(jù)。因此,本研究以桃小食心蟲化學(xué)感受蛋白為靶標(biāo)篩選出具有結(jié)合親和性的寄主揮發(fā)物分子,使用基因克隆、熒光定量、原核表達與純化等技術(shù)手段體外表達出目的蛋白,利用熒光競爭結(jié)合實驗篩選與桃小... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

桃小食心蟲總RNA樣品檢測Fig.2-1TotalRNAofC.sasakii

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)碩士學(xué)位論文第二章桃小食心蟲CSPs基因克隆17預(yù)測的信號肽序列用下劃線表示，4個保守的半胱氨酸位點在圓圈內(nèi)，終止密碼子用*號表示。Theunderlinesequencesrepresenttheaminoacidpredictedsignalpeptide.Thefourconservedcysteinesaredisplayedincircleandstopcodonisdenotedbyredasterisk.圖2-2CsasCSPs的核苷酸和氨基酸序列Fig.2.2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCsasCSP5fromC.sasakii.

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)碩士學(xué)位論文第四章CsasCSP16分子對接與動力學(xué)模擬4.3.2桃小食心蟲CsasCSP16與配體分子對接桃小食心蟲CsasCSP16與氣味分子，水楊酸甲酯、庚酸乙酯、α-蒎烯、十五烷和6-甲基-5-庚烯-2-酮對接的VinaScore值分別為：-6.1、-5.2、-6.6、-5.8和-5.3。由CB-Dock預(yù)測的結(jié)合口袋可以看出，所有的氣味分子都在疏水性結(jié)合腔的內(nèi)部（圖4-3）。CsasCSP16與氣味分子間的作用力主要有范德華力和疏水作用力，并且α-蒎烯與Thr-87殘基形成氫鍵。在對家蠶的氣味結(jié)合蛋白的研究中發(fā)現(xiàn)，氫鍵具有特異性識別性信息素的功能。因此CsasCSP16可能具有特異性識別α-蒎烯的功能。結(jié)合模式分析發(fā)現(xiàn)，這些配體都結(jié)合在CsasCSP16形成的疏水口袋中，在許多疏水性的氨基酸周圍（圖4.4）。這些結(jié)合特征與其他的OBPs和CSPs相一致(Campanaccietal.,2003b;Jansenetal.,2007;Tomasellietal.,2006)。結(jié)合在疏水性口袋中的5個氣味分子都有以下疏水性氨基酸的參與：Ile-49、Leu-53、Ile-72、Trp-83、Leu-86和Tyr-100。這些氨基酸殘基與所有配體都有作用，這說明他們在CsasCSP16結(jié)合配體的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。亮氨酸、異亮氨酸和色氨酸也是CSPMbraA6結(jié)合配體過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的氨基酸，這表明這三個氨基酸參與了昆蟲配體結(jié)合的過程(Campanaccietal.,2003a)。氣味分子為：水楊酸甲酯、庚酸乙酯、α-蒎烯、十五烷和6-甲基-5-庚烯-2-酮。Methylsalicylate,Ethylheptanoate,α-Pinene,Pentadecane,6-Methyl-5-hepten-2-one.圖4-3CsasCSP16在預(yù)測的結(jié)合口袋與不同氣味分子結(jié)合模式Fig.4-3BindingmodesofthedifferentligandsintheputativebindingpocketofCsasCSP16.40

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氯蟲苯甲酰胺干擾桃小食心蟲交配的轉(zhuǎn)錄組分析[J]. 孫麗娜,田志強,張懷江,李艷艷,閆文濤,岳強,仇貴生.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(15)
[2]中華蜜蜂氣味結(jié)合蛋白基因AcerOBP14的克隆及時空表達[J]. 杜亞麗,張中印,潘建芳,王樹杰,楊爽,趙慧婷,姜玉鎖.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(19)
[3]昆蟲外周嗅覺系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究進展[J]. 杜立嘯,劉楊,王桂榮.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2016(05)
[4]3MBA類FtsZ蛋白抑制劑的分子動力學(xué)模擬及抗菌作用機制[J]. 張賀,盧俊瑞,穆江蓓,劉金彪,楊旭云,王美君,張瑞波.  物理化學(xué)學(xué)報. 2015(03)
[5]昆蟲嗅覺相關(guān)蛋白及嗅覺識別機理研究概述[J]. 胡穎穎,徐書法,Abebe J.Wubie,李薇,國占寶,周婷.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2013(05)
[6]不同寄主植物對桃小食心蟲生長發(fā)育和繁殖的影響[J]. 李定旭,雷喜紅,李政,高靈旺,沈佐銳.  昆蟲學(xué)報. 2012(05)
[7]桃小食心蟲的研究現(xiàn)狀[J]. 王鵬,于毅,張思聰,張安盛,門興元,凌飛,許永玉,李麗莉.  華東昆蟲學(xué)報. 2009(02)
[8]中華蜜蜂化學(xué)感受蛋白cDNA克隆、定位及其表達[J]. 李紅亮,樓兵干,程家安,高其康.  科學(xué)通報. 2007(08)
[9]桃小食心蟲的研究概況[J]. 劉玉升,程家安,牟吉元.  山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1997(02)
[10]桃小食心蟲寄主生物型的初步研究[J]. 花蕾,花保禎.  植物保護學(xué)報. 1995(02)

博士論文
[1]桃蛀螟性信息素結(jié)合蛋白的功能研究[D]. 葛星.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[2]幾種疾病相關(guān)重要蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)及作用機理的分子動力學(xué)模擬研究[D]. 褚雯婷.吉林大學(xué) 2014
[3]小地老虎性信息素通訊的分子和細(xì)胞機制[D]. 谷少華.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號：3383032