NF-κB是一種序列特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子。在未激活狀態(tài)下,NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合滯留在細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到刺激,如病毒感染、紫外線照射、細(xì)胞因子（TNFα等）作用下,通過細(xì)胞內(nèi)的NF-κB信號傳導(dǎo)通路,抑制蛋白IκB降解,NF-κB進入細(xì)胞核,與核內(nèi)DNA靶點結(jié)合,控制其眾多靶基因的表達,從而參與細(xì)胞生長、分裂、凋亡、更新、炎癥、癌變等生理及病理過程。NF-κB在炎癥和癌癥中被廣泛激活,因此一度成為藥物篩選和疾病治療的重要靶點,如各種NF-κB抑制劑的開發(fā)。但由于NF-κB所具有的雙刃劍作用,傳統(tǒng)NF-κB抑制劑因其顯著的副作用而始終未成為臨床藥物。因此,基于NF-κB的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值的探索需要新的研究策略。本研究發(fā)展了三種基于NF-κB的新型基因表達控制技術(shù),并探索了其生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值。1.基于NF-κB的高活性真核啟動子研制及其應(yīng)用研究人巨細(xì)胞病毒（hCMV）主要早期啟動子（MIEP）是目前生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和各類基因工程、基因治療、基因編輯中廣泛使用的活性最高的真核啟動子。本研究用指數(shù)富集（SELEX）系統(tǒng)篩選獲得的高親和力人工序列替換人MIEP中的天然NF-κB結(jié)... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

NF-κB信號通路組成[5]

通過產(chǎn)生這些成分，NF-κB 產(chǎn)生負(fù)反饋回路以將針對 NF-κB 的負(fù)調(diào)控添加到該途徑[17, 18]（圖 1.2）。在非經(jīng)典途徑中（圖 1.2）沒有 IκB，但是 RelB/p100 復(fù)合物在細(xì)胞質(zhì)中是無活性的[17]。非規(guī)范或替代途徑主要通過 p100 的可誘導(dǎo)處理激活 RelB-p52 復(fù)合物。非經(jīng)典途徑通過發(fā)育信號如 BAFFR、CD40 或 LTβR 被激活，來自分化簇 40 配體（CD40L）、淋巴毒素 β 受體（LTβR）和 B 細(xì)胞活化因子受體（BAFFR）的信號導(dǎo)致 NF-κB 誘導(dǎo)激酶（NIK）活化，NIK 通過磷酸化激活同型二聚體 IKKα/IKKα，磷酸基團與 p100 的 C-末端殘基被泛素化并隨后磷酸化 p100，p100 磷酸化導(dǎo)致其被蛋白酶體加工成 p52，產(chǎn)生活躍的 RelB/p52 二聚體，最終導(dǎo)致 RelB/p52 的核易位和靶基因表達的誘導(dǎo)[19, 20]。與典型途徑不同，該途徑被更多數(shù)量的配體所影響，如屬于 TNF 家族的 B 細(xì)胞激活因子（BAFF）、CD40L、淋巴毒素 β（LTβ）、受體激活劑核因子配體（RANKL）或 CD30L。這些細(xì)胞表面分子的觸發(fā)涉及細(xì)胞凋亡抑制劑（cIAP1 和 cIAP2），TRAF2 和 TRAF3 的信號復(fù)合物的組裝。這些受體的參與會引起由 TRAF2 介導(dǎo)的 cIAP1/2 的募集和激活，從而導(dǎo)致 TRAF3 的降解，阻止 NF-κB 誘導(dǎo)激酶的持續(xù)降解，而 NIK 激酶是該途徑的中心[21]。

核心啟動子元件確定，而上游增強子元件有助于確定轉(zhuǎn)錄頻率或啟動子強度。核心啟動子是啟動轉(zhuǎn)錄所需的最小啟動子區(qū)[84-86]，通常是小于 80 個核苷酸的簡潔區(qū)段，從+1位點上游或下游延伸約 35bp[84, 87]。多細(xì)胞動物核心啟動子結(jié)構(gòu)最近已被深入研究，研究人員發(fā)現(xiàn)了很多可能包含調(diào)節(jié)核心啟動子活性的各種不同的 DNA 基序[87, 88]。TATA 盒結(jié)合蛋白識別序列（TATAWAAR）、BRE（轉(zhuǎn)錄因子 IIB 識別序列，SSRGCC）、Inr（起始序列，YYANWYY）、MTE（基序十元件，CSARCSSAAC）、DCE（下游核心元件）、DPE（下游核心啟動子元件）、XCPE1（X 核心啟動子元件）和 DPE（下游啟動子元件，RGWYV），這些基序是 RNA 聚合酶 II 驅(qū)動轉(zhuǎn)錄的接觸點[84, 89]。除了基于TATA 盒的啟動子之外，研究人員也已經(jīng)用現(xiàn)代基因組工具鑒定出了更具可塑性和可進化性的 CpG 豐富的哺乳動物啟動子。與基于 TATA 盒的啟動子相比，這些啟動子具有多個轉(zhuǎn)錄起始位點。轉(zhuǎn)錄由核心啟動子啟動后，基因表達被增強子和內(nèi)含子等 DNA 元件增強。增強子能夠招募各種轉(zhuǎn)錄因子來激活轉(zhuǎn)錄，并且可以獨立于位置和方向而起作用[90]。增強子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子通過與基本轉(zhuǎn)錄元件直接相互作用[91]或通過形成復(fù)合物和募集酶來重塑染色質(zhì)結(jié)構(gòu)以調(diào)節(jié)啟動子活性[92]。衍生自人巨細(xì)胞病毒主要立即早期基因的啟動子是工業(yè)中高治療性重組蛋白表達最常用的啟動子[93]。


本文編號：3377994