目的:構(gòu)建SETD8重組慢病毒載體,探討SETD8對人乳腺癌細(xì)胞周期、氧化應(yīng)激的影響,并觀察穩(wěn)定敲低SETD8后對乳腺癌細(xì)胞多西他賽敏感性的影響。方法:構(gòu)建含SETD8基因的重組慢病毒載體,經(jīng)轉(zhuǎn)染,熒光顯微鏡觀察感染效率;采用RT-qPCR和Western blot檢測SETD8 m RNA和蛋白相對表達(dá)量;采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期及活性氧水平,通過CCK-8試劑檢測穩(wěn)定敲低SETD8基因的乳腺癌細(xì)胞對多西他賽的敏感性變化。結(jié)果:成功包裝慢病毒,熒光觀察慢病毒感染效率在85%左右,通過PCR和WB驗(yàn)證SETD8過表達(dá)及敲低穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的效率顯著（P<0.01）。低表達(dá)SETD8的乳腺癌細(xì)胞周期停滯在G2/M和S期,細(xì)胞內(nèi)ROS水平高于對照組。不同濃度多西他賽處理的SETD8敲低穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的細(xì)胞活性較對照組明顯降低（P<0.01）。結(jié)論:慢病毒介導(dǎo)下調(diào)SETD8表達(dá),使得乳腺癌細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,細(xì)胞內(nèi)ROS增多,與多西他賽發(fā)生協(xié)同作用,從而增加了藥物敏感性。 

【文章來源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,20(12)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染使SETD8在MDA-MB-231細(xì)胞靜默，如圖是轉(zhuǎn)染72H后熒光密度觀察（A為MDA-MB-231陰性對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株，BC為MDA-MB-231敲低shSETD8穩(wěn)轉(zhuǎn)株）

絕大多數(shù)乳腺癌患者死于腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，研究表明因腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移死亡的患者中有90%的人發(fā)生耐藥[8]。耐藥的發(fā)生機(jī)制包括：腫瘤細(xì)胞的EMT特性，腫瘤干細(xì)胞的免疫逃逸作用，腫瘤代謝重編程，DNA損傷修復(fù)能力強(qiáng)等[9,10]。因此，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對多西他賽的敏感性，提高療效成為提高乳腺癌患者生存率的重要途徑。圖3 SETD8能夠參與調(diào)控乳腺癌細(xì)胞周期進(jìn)程A-B:shSETD8轉(zhuǎn)染231細(xì)胞后細(xì)胞周期比例變化與control組比較；C-D:SETD8轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞后細(xì)胞周期比例變化與陰性對照組比較。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.

圖2 AC通過RT-qPCR進(jìn)行SETD8敲低和過表達(dá)mRNA效果檢測；BD通過Western blot進(jìn)行慢病毒敲減和過表達(dá)SETD8蛋白效果檢測圖4 SETD8對乳腺癌細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的影響


本文編號：3376741