柞蠶作為無脊椎動(dòng)物,不具備獲得性免疫,主要依賴發(fā)達(dá)的天然免疫系統(tǒng)抵御病原微生物的入侵。昆蟲的天然免疫系統(tǒng)主要包括物理防御、體液免疫和細(xì)胞免疫三個(gè)部分。天然免疫始于對(duì)病原微生物的識(shí)別,這一過程是通過昆蟲體內(nèi)的模式識(shí)別受體識(shí)別并結(jié)合病原微生物表面特有的模式分子實(shí)現(xiàn)的。模式識(shí)別受體與病原體相關(guān)性分子模式的相互作用會(huì)誘導(dǎo)一系列免疫應(yīng)答反應(yīng),包括吞噬作用、黑化作用及產(chǎn)生抗菌肽、抗病毒因子等,從而激活宿主的防御系統(tǒng)。由于其結(jié)合碳水化合物的能力,凝集素在許多生物過程中都起著重要作用,包括蛋白質(zhì)合成和運(yùn)輸,細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),病原微生物識(shí)別等。凝集素作為一種模式識(shí)別受體,序列中含有特異性碳水化合物識(shí)別結(jié)構(gòu)域CRD,不同的CRD具有特有的結(jié)構(gòu)并能夠識(shí)別病原微生物表面特定的模式分子,從而激活昆蟲免疫防御系統(tǒng)。其中C型凝集素是天然免疫模式識(shí)別受體的一個(gè)主要家族,也是最大的動(dòng)物凝集素家族之一,其對(duì)病原體表面上的糖蛋白和糖脂都有很好的結(jié)合能力。本研究以5種微生物對(duì)柞蠶蛹進(jìn)行誘導(dǎo)處理,檢測(cè)了柞蠶凝集素基因的誘導(dǎo)表達(dá)情況,探索凝集素基因在不同誘導(dǎo)條件下在不同組織中的表達(dá)差異,為深入研究凝集素在柞蠶免疫系統(tǒng)中的作用機(jī)制及激... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲免疫
    1.2 模式識(shí)別受體
    1.3 天然免疫對(duì)感染的應(yīng)答
    1.4 柞蠶病毒簡(jiǎn)介
    1.5 研究技術(shù)路線
    1.6 研究目的及意義
2 柞蠶凝集素基因的表達(dá)譜分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 主要生化試劑
        2.2.3 主要溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)時(shí)定量PCR引物的設(shè)計(jì)
        2.3.2 柞蠶蛹的誘導(dǎo)
        2.3.3 柞蠶蛹組織RNA的提取和cDNA的合成
        2.3.4 柞蠶凝集素基因誘導(dǎo)表達(dá)的實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 RNA的純度檢測(cè)
        2.4.2 柞蠶凝集因素基因在不同病原微生物處理下的表達(dá)譜分析
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 柞蠶ApCTL基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 主要生化試劑
        3.2.3 常用溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 柞蠶蛹誘導(dǎo)、RNA的提取及cDNA的合成
        3.3.2 柞蠶ApCTL基因的克隆
        3.3.3 柞蠶ApCTL基因生物信息學(xué)分析
        3.3.4 基于同源建模的柞蠶ApCTL基因功能分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 柞蠶ApCTL基因的克隆
        3.4.2 酶切鑒定
        3.4.3 柞蠶ApCTL基因的序列分析
        3.4.4 蛋白質(zhì)性質(zhì)分析
        3.4.5 柞蠶ApCTL基因同源性分析
        3.4.6 同源建模功能分析
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 柞蠶ApCTL基因表達(dá)載體的構(gòu)建及重組病毒的篩選
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 工具酶與試劑
        4.2.3 主要試劑配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 轉(zhuǎn)移表達(dá)載體pApM748BE-CTL的構(gòu)建
        4.3.2 昆蟲Tn-Hi5細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
        4.3.3 轉(zhuǎn)移表達(dá)載體質(zhì)粒pApM748BE-CTL與重組病毒ApNPV-Δph/egfp~+基因組DNA共轉(zhuǎn)染
        4.3.4 重組病毒ApNPV-CTL的篩選與PCR鑒定
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 ApNPV轉(zhuǎn)移表達(dá)載體pApM748BE-CTL的構(gòu)建與鑒定
        4.4.2 共轉(zhuǎn)染與重組病毒的篩選結(jié)果
        4.4.3 重組病毒ApNPV-Δph/Δegfp/CTL的鑒定
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
5 柞蠶重組ApCTL凝集素蛋白表達(dá)純化與活性檢測(cè)
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 主要溶液配制
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 重組凝集素蛋白ApCTL在柞蠶體內(nèi)的表達(dá)
        5.3.2 發(fā)病柞蠶蛹預(yù)處理
        5.3.3 重組凝集素ApCTL純化方法的初步建立
        5.3.4 重組凝集素ApCTL的鑒定
        5.3.5 重組凝集素ApCTL凝集活性檢測(cè)
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 重組凝集素ApCTL的硫酸銨沉淀
        5.4.2 重組凝集素ApCTL鎳柱親和層析
        5.4.3 重組凝集素ApCTL凝膠過濾層析
        5.4.4 重組凝集素ApCTL凝菌活性檢測(cè)
        5.4.5 重組凝集素ApCTL凝血活性檢測(cè)
    5.5 討論
    5.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3375953