本研究克隆了馬鈴薯甲蟲(chóng)類胰島素信號(hào)通路關(guān)鍵組分akt（蛋白激酶B）及tsc1和tsc2基因,進(jìn)行多重序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育分析,通過(guò)qPCR技術(shù),對(duì)幾個(gè)基因的時(shí)空表達(dá)進(jìn)行了分析,研究幾個(gè)關(guān)鍵基因在幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的功能以及對(duì)其糖脂代謝的影響,并探究了類胰島素與保幼激素和蛻皮激素中互作中的緊密聯(lián)系,通過(guò)RNAi技術(shù)對(duì)幾個(gè)關(guān)鍵基因的功能與激素互作調(diào)節(jié)關(guān)系進(jìn)行了闡述。鑒于akt在進(jìn)化中基因功能穩(wěn)定的傳遞及幼蟲(chóng)顯著降低的化蛹和羽化率,推薦akt作為害蟲(chóng)防治的新靶標(biāo)。本文章主要獲得了以下的結(jié)果:1.馬鈴薯甲蟲(chóng)類胰島素途徑關(guān)鍵基因的序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育分析通過(guò)NCBI在線BLAST將馬鈴薯甲蟲(chóng)akt基因翻譯的氨基酸序列進(jìn)行相似性搜索比對(duì),將5種昆蟲(chóng)的氨基酸序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn),LdAKT與其他物種的AKT的序列一致性比較高,這表明Ldakt基因在進(jìn)化過(guò)程中具有較好的保守性。利用NJ系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)樹(shù)方法發(fā)現(xiàn),馬鈴薯甲蟲(chóng)與鞘翅目的光肩星天牛Anoplophora glabripennis和白蠟窄吉丁Agrilus planipennis親緣關(guān)系較近,且聚為一支。在線BLAST將馬鈴薯甲蟲(chóng)tsc1/2基因翻譯的氨基酸... 

【文章來(lái)源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

類胰島素信號(hào)通路圖[KEGG]

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第1章緒論6Cry基因復(fù)合體。隨后2017年美國(guó)環(huán)保署批準(zhǔn)采用RNA干擾技術(shù)的抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因玉米SmartStaxPRO，“SmartStaxPRO”是插入了三個(gè)Cry表達(dá)基因和一個(gè)含有DiabroticavirgiferavirgiferaSnf7(DvSnf7)的240bpdsRNA片段，此為首款同時(shí)防治地上和地下害蟲(chóng)的產(chǎn)品RNA干擾技術(shù)，可以克服對(duì)Bt技術(shù)產(chǎn)生抗藥性昆蟲(chóng)的情況，還能保證精準(zhǔn)的抗蟲(chóng)效果。1.4.1RNAi的作用機(jī)制RNA干擾是一種普遍的轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象[47]，由siRNA(smallintereferenceRNA)觸發(fā)，是外源dsRNA在Dicer酶作用下，所產(chǎn)生的長(zhǎng)度為21-22bp的siRNA，具有很強(qiáng)的沉默基因功能,能夠介導(dǎo)RNA干涉等，誘導(dǎo)出一種由siRNA與內(nèi)環(huán)境的一些酶（內(nèi)切酶、外切酶以及螺旋酶等）結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)。RISC能夠解開(kāi)siRNA，并精確的指導(dǎo)特異性mRNA降解，從而抵抗外來(lái)基因侵入及病毒感染。因此，將dsRNA分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，可以特異性地降解細(xì)胞內(nèi)與其同源的mRNA，使靶標(biāo)基因的不表達(dá)或表達(dá)水平下降，通過(guò)封閉內(nèi)源性基因的表達(dá)，來(lái)短暫的失活該基因或?qū)崿F(xiàn)基因功能喪失。1.4.2RNAi途徑在昆蟲(chóng)和其他節(jié)肢動(dòng)物中，已知以下三種不同類型，且起著至關(guān)重要的作用小RNA，可以觸發(fā)siRNA、miRNA和piRNA三種相應(yīng)的RNAi途徑（圖1-2）[48-49]。圖1-2.在昆蟲(chóng)中鑒定出不同RNA干擾（RNAi）途徑的機(jī)制[16]。Figure1-2.MechanismsofdifferentRNAinterference(RNAi)pathwaysidentifiedininsects[16].

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章馬鈴薯甲蟲(chóng)胰島素關(guān)鍵基因的克隆和RNAi生物測(cè)定23圖2-2.昆蟲(chóng)TSC1/2蛋白的氨基酸序列比對(duì)（A/B）黑色條表示TSC1/2的功能域，黑色、灰色、白色陰影分別表示氨基酸序列的一致性100%，80%和80%以下。Fig2-2Multiplealignmentofaminoacidsequence（A/B）ofTSC1/2proteinsininsectsBlackboxshowsFunctionaldomainofTSC1/2.Black,gray,andwhiteshadowsindicatethattheaminoacidsequenceidentitiesare100%,80%,andbelow80%,respectively.2.2.2馬鈴薯甲蟲(chóng)類胰島素途徑關(guān)鍵基因的進(jìn)化分析利用NJ系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)樹(shù)方法發(fā)現(xiàn)，馬鈴薯甲蟲(chóng)AKT與鞘翅目的光肩星天牛Anoplophoraglabripennis和白蠟窄吉丁Agrilusplanipennis直系同源蛋白親緣關(guān)系較近，且聚為一支；半翅目的茶翅蝽Halyomorphahalys和溫帶臭蟲(chóng)Cimexlectularius聚為一支，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]馬鈴薯甲蟲(chóng)N-β-丙酰多巴胺水解酶基因的克隆及功能分析[J]. 杜曉燕,付開(kāi)赟,徐晴玉,吐?tīng)栠d·阿合買提,丁新華,何江,郭文超.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2018(06)
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[3]腺苷高半胱氨酸水解酶基因dsRNA對(duì)馬鈴薯甲蟲(chóng)幼蟲(chóng)毒力測(cè)定[J]. 李曉旭,郭文超,付開(kāi)赟,李國(guó)清,吐?tīng)栠d,何江.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(01)
[4]馬鈴薯甲蟲(chóng)3個(gè)煙堿型乙酰膽堿受體α亞基基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 李晨歌,琚陽(yáng),韓召軍,姜衛(wèi)華.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(03)
[5]我國(guó)馬鈴薯甲蟲(chóng)主要生物學(xué)、生態(tài)學(xué)技術(shù)研究進(jìn)展及監(jiān)測(cè)與防控對(duì)策[J]. 郭文超,吐?tīng)栠d,程登發(fā),譚萬(wàn)忠,張正坤,李國(guó)清,姜衛(wèi)華,鄧建宇,吳家和,鄧春生,李晶,劉小俠,呂和平.  植物保護(hù). 2014(01)
[6]我國(guó)馬鈴薯甲蟲(chóng)生物防治技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 郭文超,鄧春生,李國(guó)清,鄧建宇,姜衛(wèi)華,吳家和,王佩玲,譚萬(wàn)忠,張青文.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(12)
[7]胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、昆蟲(chóng)發(fā)育與老化[J]. 顧世紅,陳建國(guó).  昆蟲(chóng)知識(shí). 2009(04)
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博士論文
[1]馬鈴薯甲蟲(chóng)（Leptinotarsa decemlineata）海藻糖代謝和幾丁質(zhì)合成相關(guān)基因的克隆與功能分析[D]. 史繼峰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]β-抑制蛋白1及蛋白激酶B（PKB/Akt）在棉鈴蟲(chóng)脫皮激素信號(hào)通路中的功能研究[D]. 張孝乾.山東大學(xué) 2015
[3]RNA干擾馬鈴薯甲蟲(chóng)（Leptinotarsa decemlineata）氨基酸營(yíng)養(yǎng)吸收與運(yùn)輸相關(guān)的基因?qū)︻愐葝u素信號(hào)途徑的影響[D]. 付開(kāi)赟.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]馬鈴薯甲蟲(chóng)黑色素合成相關(guān)基因的克隆、功能研究及其RNAi效應(yīng)初探[D]. 杜曉燕.塔里木大學(xué) 2018
[2]BmFoxO對(duì)家蠶代謝及其生長(zhǎng)的調(diào)控[D]. 孟竹.西南大學(xué) 2018
[3]馬鈴薯甲蟲(chóng)（Leptinotarsa decemlineata）RNA干擾核心元件基因的克隆與驗(yàn)證[D]. 楊帥.石河子大學(xué) 2016
[4]褐飛虱類胰島素基因分析與功能研究[D]. 何叔舫.浙江大學(xué) 2015
[5]桔小實(shí)蠅胰島素信號(hào)通路六個(gè)重要基因的表達(dá)與功能研究[D]. 許抗抗.西南大學(xué) 2014
[6]馬鈴薯甲蟲(chóng)脯氨酸脫氫酶基因的克隆、表達(dá)分析及其dsRNA的發(fā)酵生產(chǎn)[D]. 呂東.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3354091