目的構(gòu)建急性肺損傷肺泡Ⅱ型上皮A549細(xì)胞炎癥模型,通過沉默NF-κB基因,觀察NOX1基因表達(dá)水平及氧化應(yīng)激指標(biāo)變化,探討NOX1基因與NF-κB/p65的相關(guān)性。方法運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默NF-κB/p65基因,以TNF-α（10 ng/ml）刺激肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（A549）,采用RT-PCR及Western blot檢測NOX1基因表達(dá)水平,DCFH-DA探針法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,比色法檢測細(xì)胞的總抗氧化能力、總谷胱甘肽、總超氧化物歧化酶活力和丙二醛的濃度。結(jié)果采用TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549細(xì)胞可以分別在基因和蛋白水平上調(diào)NOX1基因表達(dá);同時(shí),增加細(xì)胞丙二醛和活性氧濃度,降低總抗氧化能力、總谷胱甘肽及超氧化物歧化酶濃度,氧化應(yīng)激程度放大（P<0.05）。預(yù)轉(zhuǎn)染NF-κB/p65 siRNA,可下調(diào)NOX1基因的表達(dá),減少細(xì)胞丙二醛、活性氧生成,提高總抗氧化能力、總谷胱甘肽及超氧化物歧化酶濃度,氧化應(yīng)激程度降低（P<0.05）。結(jié)論沉默NF-κB/p65基因,可有效下調(diào)TNF-α誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激程度及NOX1基因表達(dá)水平,提示NF-κB/p65可能參... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2017,33(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組
    1.3 DCFH-DA探針法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平
    1.4 硫代巴比妥酸比色法檢測細(xì)胞的丙二醛濃度
    1.5 ABTS比色法檢測細(xì)胞總抗氧化能力
    1.6 氮藍(lán)四唑 (NBT) 比色法檢測細(xì)胞內(nèi)總超氧化物歧化酶 (SOD) 活力
    1.7 DTNB比色法檢測細(xì)胞內(nèi)總谷胱甘肽的質(zhì)量濃度
    1.8 Real-time RT-PCR檢測NOX1基因表達(dá)水平
    1.9 Western blot法檢測NOX1蛋白表達(dá)水平
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 細(xì)胞氧化指標(biāo)——活性氧、丙二醛的濃度
    2.2 細(xì)胞抗氧化指標(biāo)
    2.3 NOX1 m RNA的表達(dá)水平
    2.4 NOX1蛋白的表達(dá)水平
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]NF-κB結(jié)合元件缺失對NOX1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響[J]. 吳煒景,李理,徐采云,黃文杰.  中國病理生理雜志. 2014(10)
[2]沉默NF-κB p65基因下調(diào)TNF-α誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[J]. 吳煒景,李躍飛,李理,李偉峰,黃文杰.  免疫學(xué)雜志. 2012(01)



本文編號：3354335