第一部分甲基丙二酸血癥熱點(diǎn)致病基因突變的選擇和基因檢測(cè)目的:甲基丙二酸血癥是我國(guó)最常見(jiàn)的有機(jī)酸代謝障礙。該病的病因較為復(fù)雜,多種基因突變均可引起甲基丙二酰輔酶A變位酶的缺乏或其輔酶鈷胺素代謝障礙,從而導(dǎo)致患兒發(fā)病。不同國(guó)家和地區(qū)的生化表型及基因譜不盡相同。由于山東半島的甲基丙二酸血癥發(fā)病率明顯高于其他地區(qū),擬在我地區(qū)進(jìn)行甲基丙二酸血癥攜帶者篩查,了解疾病高發(fā)原因。本研究的主要目的為:第一,通過(guò)收集我中心完成基因檢測(cè)的甲基丙二酸血癥患者了解我地區(qū)甲基丙二酸血癥的熱點(diǎn)基因和突變,并結(jié)合文獻(xiàn)篩選該地區(qū)常見(jiàn)的突變基因和突變位點(diǎn),用于進(jìn)行山東半島甲基丙二酸血癥攜帶者篩查。第二:根據(jù)選擇位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,采用多重PCR結(jié)合二代測(cè)序的方法,旨在建立和評(píng)估適合本地區(qū)特點(diǎn)的熱點(diǎn)基因突變的基因檢測(cè)及大規(guī)模人群篩查的技術(shù)路線,并收集4例甲基丙二酸血癥陽(yáng)性樣本及6例正常樣本,明確檢測(cè)方法的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。方法:收集完成基因檢測(cè)的甲基丙二酸血癥患兒35例,結(jié)合我國(guó)文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行山東半島甲基丙二酸血癥熱點(diǎn)基因、熱點(diǎn)位點(diǎn)的選擇。針對(duì)選擇的突變位點(diǎn),利用Primer Z軟件設(shè)計(jì)PCR引物。收集甲基... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

凝膠電泳結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果412.3各分型甲基丙二酸血癥篩查分布情況MMACHC基因篩查出攜帶者人數(shù)為109人，占87.2%；MUT篩查出攜帶者人數(shù)為16人，占12.8%（圖2.1）。圖2.1各分型甲基丙二酸血癥攜帶者分布情況3熱點(diǎn)突變位點(diǎn)攜帶情況3.1MMACHC基因MMACHC基因篩查的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的總體攜帶率為1/46。其中c.609G>A攜帶率為0.84%、c.658_660delAAG攜帶率為0.28%、c.80A>G攜帶率為0.18%、c.217C>T攜帶率為0.12%、c.567_568insT攜帶率為0.14%、c.482G>A攜帶率為0.36%、c.315C>G攜帶率為0.22%。最常見(jiàn)的突變位點(diǎn)為c.609G>A，占所有熱點(diǎn)位點(diǎn)的38.53%；其次分別為c.482G>A和c.658_660delAAG，分別占所有熱點(diǎn)位點(diǎn)的16.51%、12.84%（表2.4）。由于篩查位點(diǎn)的僅為大約90%的MMACHC基因突變，推測(cè)cblC型甲基丙二酸血癥致病基因的總體攜帶率為1/41左右。MMACHC基因87.2%MUT基因12.8%

凝膠電泳結(jié)果


本文編號(hào)：3354033