發(fā)布時(shí)間：2017-04-29 13:03

  本文關(guān)鍵詞：亳菊抗旱轉(zhuǎn)基因體系建立及抗旱性評價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：亳菊(Dendranthema morifolium'Bozhou')主要產(chǎn)于安徽省亳州市,是安徽省道地中藥材,也是我國四大名菊之一。其花中含有的生物活性物質(zhì),如揮發(fā)油、黃酮類化合物等成分能疏風(fēng)清陽、明目解毒,主治高血壓,冠心病等,且具有抗癌、抗腫瘤等功效,也是常用飲料的主要添加調(diào)味劑之一,是藥用和飲料兼用的中藥材,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。一直被認(rèn)為藥用菊花中品質(zhì)最好的亳菊由于種性退化嚴(yán)重、易感染、抗逆性弱等原因而面臨極大的風(fēng)險(xiǎn),真正的亳菊種植面積正在逐漸的減少。據(jù)統(tǒng)計(jì),安徽省由于干旱導(dǎo)致的亳菊減產(chǎn)遠(yuǎn)多于其他非生物因素造成的減產(chǎn)的總和。因此,改良亳菊耐旱性水平是目前關(guān)鍵技術(shù)之一,但由于亳菊屬高度雜合,常規(guī)的雜交等育種技術(shù)很難得到應(yīng)用。本試驗(yàn)根據(jù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理,以亳菊莖段外植體為受體材料,抗草甘膦除草劑為篩選標(biāo)記基因,通過發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入EDT1抗旱基因,取得以下結(jié)果：1.通過熱激轉(zhuǎn)化法將工程載體質(zhì)粒導(dǎo)入發(fā)根農(nóng)桿菌A4中,對工程菌生長曲線測定結(jié)果表明,工程菌對數(shù)生長期在OD600=0.6左右。2.以草甘膦為篩選劑,設(shè)置50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400mg/L,5個(gè)濃度梯度,對亳菊組培苗致死率的研究表明,其最佳篩選濃度為100mg/L。3.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo),對影響亳菊遺傳轉(zhuǎn)化效率的四個(gè)因素進(jìn)行討論：侵染時(shí)間、農(nóng)桿菌菌液濃度、乙酰丁香酮濃度和共培養(yǎng)時(shí)間,在菌液濃度(OD600)為0.6-0.8,乙酰丁香酮濃度150μmol/L,侵染時(shí)間25 min,共培養(yǎng)3 d,除菌培養(yǎng)后,可得到15 d最大轉(zhuǎn)化效率95.6%。4.剪取誘導(dǎo)產(chǎn)生的毛狀根2 cm左右,轉(zhuǎn)入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷,兩周繼代培養(yǎng)-次,可以得到大量叢生芽。5.剪取2 cm左右叢生芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中,并在生根培養(yǎng)基中添加100mg/L的草甘膦作為篩選劑,無菌培養(yǎng)30 d,采用CTAB法,提取在添加篩選劑下能正常生長的植物葉片基因組DNA,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測,初步得到5株轉(zhuǎn)基因植株。6.在干旱脅迫下,分別提取并測定毫菊葉片中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)的含量,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因植株相對于非轉(zhuǎn)基因植株具有較高的耐旱性。
【關(guān)鍵詞】：毫菊 發(fā)根農(nóng)桿菌 EDT1 再生植株 抗氧化酶
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S567.239
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第1章 緒論9-20
• 1.1 中藥資源概述9-11
• 1.1.1 菊花資源簡介10-11
• 1.1.2 菊花主要藥用成分11
• 1.2 亳菊研究概況11-12
• 1.2.1 亳菊性狀簡介11
• 1.2.2 亳菊研究現(xiàn)狀11-12
• 1.3 植物基因工程技術(shù)在提高中藥品質(zhì)中的研究進(jìn)展12-15
• 1.3.1 生產(chǎn)中藥材有效成分13
• 1.3.2 提高中草藥有效成分含量13-14
• 1.3.3 提供生物合成反應(yīng)器原料14-15
• 1.3.4 提高中草藥植物抗病性和抗逆性15
• 1.4 發(fā)根農(nóng)桿菌在轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化體系中的應(yīng)用15-16
• 1.5 AtEDT1/HDG11抗旱基因研究進(jìn)展16-17
• 1.6 植物抗逆性研究概況17
• 1.7 藥用植物轉(zhuǎn)基因安全性17-18
• 1.8 本文研究的目的與意義18-19
• 1.8.1 研究目的18
• 1.8.2 研究內(nèi)容18
• 1.8.3 研究意義18-19
• 1.9 創(chuàng)新點(diǎn)19-20
• 第2章 試驗(yàn)材料與方法20-27
• 2.1 試驗(yàn)材料20-21
• 2.1.1 植物材料20
• 2.1.2 轉(zhuǎn)化菌株與工程載體質(zhì)粒20
• 2.1.3 主要試驗(yàn)試劑20
• 2.1.4 主要試驗(yàn)儀器設(shè)備20-21
• 2.1.5 試驗(yàn)常用培養(yǎng)基21
• 2.2 試驗(yàn)方法21-27
• 2.2.1 植物材料無菌處理21-22
• 2.2.2 發(fā)根農(nóng)桿菌A4活化與培養(yǎng)22
• 2.2.3 基因工程菌構(gòu)建與生長曲線測定22-23
• 2.2.4 草甘膦有效篩選濃度實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.5 發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化與植株再生23-24
• 2.2.6 堿裂解法提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒24
• 2.2.7 植物基因組DNA提取(CTAB法)24-25
• 2.2.8 毛狀根與再生植株P(guān)CR檢測25-26
• 2.2.9 煉苗與草甘膦除草劑抗性檢測26
• 2.2.10 亳菊葉片抗氧化酶活性與MDA含量的測定26
• 2.2.11 數(shù)據(jù)處理26-27
• 第3章 結(jié)果與分析27-40
• 3.1 工程農(nóng)桿菌構(gòu)建與生長曲線測定27-30
• 3.1.1 工程農(nóng)桿菌菌篩選27-28
• 3.1.2 工程菌生長曲線測定28-30
• 3.2 目的基因PCR退火溫度的優(yōu)化30
• 3.3 草甘膦篩選濃度30-32
• 3.4 不同轉(zhuǎn)化條件對毫菊遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響32-33
• 3.5 毛狀根誘導(dǎo)愈傷組織與植株再生33-35
• 3.6 再生植株初篩選與PCR檢測35-36
• 3.6.1 毛狀根的PCR檢測35
• 3.6.2 再生植株抗性篩選與PCR檢測35-36
• 3.7 抗性植株煉苗與抗草甘膦檢測36-37
• 3.8 抗氧化酶活性與MDA含量測定37-40
• 第4章 討論與結(jié)論40-43
• 4.1 討論40-42
• 4.1.1 植物轉(zhuǎn)基因工程研究中標(biāo)記基因的選擇40
• 4.1.2 植物遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響因素40-41
• 4.1.3 植物抗旱性與生理生化指標(biāo)的相關(guān)性41-42
• 4.1.4 藥用植物轉(zhuǎn)基因安全性42
• 4.2 結(jié)論42-43
• 展望43-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 附錄51-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉標(biāo);韓娟;薛X;;轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境監(jiān)測進(jìn)展[J];生態(tài)學(xué)報(bào);2016年09期

2 俞年軍;于嬌;張偉;曹勇;鄭太華;王韻琴;;亳菊HPLC特征指紋圖譜研究[J];中藥材;2015年03期

3 滕中秋;申業(yè);;藥用植物基因工程的研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2015年04期

4 孫越;劉秀霞;李麗莉;官峗峗;張舉仁;;抗亞洲玉米螟、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米的培育[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2015年01期

5 薛曉鋒;周巖;陳亞東;陶燁;陳燕繪;;超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)SeNHX1基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2014年18期

6 劉宏焱;;利辛縣亳菊生物學(xué)特性及栽培技術(shù)[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2014年09期

7 張芳;王舟;宗俊勤;劉建秀;佘建明;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的假儉草遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[J];草業(yè)學(xué)報(bào);2011年02期

8 栗燕;黎明;袁曉晶;李永華;;干旱脅迫下菊花葉片的生理響應(yīng)及抗旱性評價(jià)[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年01期

9 盧寶榮;夏輝;;轉(zhuǎn)基因植物的環(huán)境生物安全:轉(zhuǎn)基因逃逸及其潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)的研究和評價(jià)[J];生命科學(xué);2011年02期

10 江芹;李衛(wèi)文;董玲;廖華俊;俞年軍;;亳菊的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年34期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 焦改麗;吳慎杰;李靜;張換樣;解曉紅;楊曉麗;史秀梅;;EDT1基因在棉花抗旱耐鹽育種中的應(yīng)用[A];2012年中國作物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 湯其坤;重離子輻照甜葉菊抗寒品系篩選及糖苷快速檢測方法建立[D];安徽大學(xué);2014年

2 王霏;亳菊資源與種苗繁育及品質(zhì)分析的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 宋張悅;以草甘膦為篩選劑的大豆轉(zhuǎn)基因研究[D];浙江大學(xué);2013年

4 姚萍;中國中藥出口貿(mào)易發(fā)展現(xiàn)狀分析及對策研究[D];東北財(cái)經(jīng)大學(xué);2012年

5 李亞慧;菊花微衛(wèi)星位點(diǎn)引物開發(fā)及遺傳多樣性分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 謝鑫星;高效的農(nóng)桿菌介導(dǎo)紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[D];蘭州大學(xué);2010年

7 李敬娜;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的抗草甘膦基因玉米遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];海南大學(xué);2010年

8 代麗萍;亳菊脫病毒技術(shù)研究及其品質(zhì)測定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 謝作成;藥用菊花植物學(xué)性狀及活性成分動(dòng)態(tài)積累的初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：亳菊抗旱轉(zhuǎn)基因體系建立及抗旱性評價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：334892