本研究以圭亞那柱花草‘1979’（Stylosanthes guianensis‘1979’,母本,花粉不育）和‘熱研2號(hào)’柱花草（輪回父本）的BC₁F₁代群體為材料,利用簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性（Inter-simple Sequence Repeat,ISSR）技術(shù),結(jié)合集群分組分析法（Bulked Segregate Analysis,BSA）構(gòu)建花粉育性基因池。結(jié)果表明:利用100條ISSR引物篩選出在不育基因池中有特異條帶的引物共11條;經(jīng)BC₁F₁群體單株驗(yàn)證,有8個(gè)標(biāo)記僅在花粉不育個(gè)體中出現(xiàn),表明其與花粉不育基因連鎖;將這8個(gè)特異性片段回收、克隆、測(cè)序,并分別設(shè)計(jì)8對(duì)特異序列特異擴(kuò)增區(qū)域（Sequenced Charaeterized Amplified Region,SCAR）引物,對(duì)BC₁F₁單株進(jìn)行驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)這8條片段僅在不育個(gè)體中擴(kuò)增出目標(biāo)條帶,表明8 ISSR特異片段成功轉(zhuǎn)化為8個(gè)SCAR標(biāo)記。本研究結(jié)果為建立柱花草穩(wěn)定的雄性不育... 

【文章來(lái)源】：草地學(xué)報(bào). 2020,28(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

引物UBC816在BC1F1代分離群體各單株的擴(kuò)增情況

將上述回收的8條片段進(jìn)行測(cè)序。UBC808-350,UBC816-400,UBC817-300,UBC824-150,UBC836-400,UBC840-200,UBC843-200和UBC8 81-220的測(cè)序長(zhǎng)度分別為245 bp,442 bp,278 bp,127 bp,335 bp,151 bp,196 bp和173 bp,測(cè)序結(jié)果與目標(biāo)片段結(jié)果一致。圖2為引物UBC816特異片段測(cè)序結(jié)果,在序列的上下游都找到了引物UBC835自身及其反向互補(bǔ)序列的位置,該片段長(zhǎng)度為442 bp。與ISSR引物擴(kuò)增出的目標(biāo)片段(400 bp)結(jié)果相一致,這也證明回收片段是正確的。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,應(yīng)用DNAMAN軟件進(jìn)行分析,考慮到引物設(shè)計(jì)的原則,還有引物中GC的含量,盡量減少發(fā)卡結(jié)構(gòu)和堿基錯(cuò)配的現(xiàn)象發(fā)生,共設(shè)計(jì)了8對(duì)正反鏈的ISSR-SCAR引物,引物名稱及序列見(jiàn)表2。

利用設(shè)計(jì)的8對(duì)ISSR-SCAR引物,對(duì)BC1F1群體進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證,獲得較好的擴(kuò)增效果,在不育群體中均有目標(biāo)條帶,在可育群體中沒(méi)有目標(biāo)條帶,說(shuō)明這8個(gè)ISSR標(biāo)記成功轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記。圖3為引物ISSR-SCAR03對(duì)BC1F1群體的驗(yàn)證結(jié)果,從圖3中可以看出,3～17號(hào)BC1F1代不育群體中均擴(kuò)增出了與母本相同的442 bp的特異條帶,18～32號(hào)BC1F1代可育群體中均未擴(kuò)增出此特異條帶,說(shuō)明此ISSR標(biāo)記已被成功轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記,是與不育基因連鎖的SCAR標(biāo)記。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]籽用大麻性別連鎖標(biāo)記的驗(yàn)證及SCAR標(biāo)記開(kāi)發(fā)[J]. 趙銘森,方書(shū)生,陳瑤,康紅梅,高金虎,陳思遠(yuǎn),楊昕,馮旭平,張立武.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2019(10)
[2]工業(yè)大麻雄性相關(guān)RAPD和SCAR標(biāo)記的篩選與鑒定[J]. 姜穎,馮乃杰,王曉楠,韓喜財(cái),韓承偉,趙越,曹焜,孫宇峰,李振偉.  作物雜志. 2019(03)
[3]羅漢果性別相關(guān)的SCAR標(biāo)記篩選[J]. 謝文娟,吳鈺坡,黃江,劉彥延,林軍,莫長(zhǎng)明.  北方園藝. 2019(08)
[4]基于SSR標(biāo)記的柱花草種質(zhì)資源遺傳多樣性與群體結(jié)構(gòu)分析[J]. 卞華,申晴,韋海燕,蔣亞君,丁西朋,白昌軍.  草業(yè)科學(xué). 2019(03)
[5]紫花苜蓿細(xì)胞質(zhì)雄性不育系和保持系SCAR標(biāo)記的鑒定研究[J]. 周仂,王英哲,譚晶,徐安凱,徐博.  草地學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]柱花草雜交后代育性分離群體ISSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化與確立[J]. 張子雄,黃春瓊,劉國(guó)道,白昌軍,唐軍,王文強(qiáng).  分子植物育種. 2018(09)
[7]柱花草花粉不育和可育分離群體基因組DNA分離方法優(yōu)化[J]. 張子雄,黃春瓊,劉國(guó)道.  分子植物育種. 2017(09)
[8]南蛇藤雌性性別相關(guān)的RAPD和SCAR標(biāo)記[J]. 魏麗娟,張娟,劉林德,王蕾,趙同欣.  植物研究. 2014(05)
[9]苦瓜抗白粉病SCAR分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)[J]. 周生茂,尚小紅,梁任繁,郭元元,文俊麗,黃皓,陳振東,班美玲,黃如葵.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(10)
[10]基于SCAR分子標(biāo)記的頭花蓼分子鑒定研究[J]. 周濤,謝宇,張麗艷,魏升華,金艷蕾.  中國(guó)中藥雜志. 2013(16)

博士論文
[1]大花紅景天的ISSR遺傳多樣性與精油化學(xué)成分多樣性研究[D]. 雷一東.復(fù)旦大學(xué) 2004

碩士論文
[1]篩選與桃花粉育性基因連鎖的分子標(biāo)記及SCAR標(biāo)記的轉(zhuǎn)化[D]. 王成.延邊大學(xué) 2006



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