減毒單增李斯特菌具有成為疫苗活載體的潛力,可同時引起MHCⅠ和MHCⅡ類抗原遞呈系統(tǒng),具有強烈激發(fā)CD8+和CD4+細(xì)胞免疫的能力。構(gòu)建毒力基因缺失菌株進而評估其生物活性對于其作為疫苗活載體的開發(fā)尤為重要。本文采用同源重組技術(shù)構(gòu)建單缺失菌株Lm-△act A和雙缺失菌株Lm-△act A△/inl B,從生長狀態(tài)、毒力基因表達和對Hep G2細(xì)胞侵襲能力方面探討減毒菌株生物學(xué)特性。生長活性測定顯示兩種減毒菌株和野生型Lm（EGD-e）三者生長狀況無差異;實時定量PCR結(jié)果顯示act A基因缺失后,inl A基因表達水平上升兩倍;act A和inl B基因雙缺失后,plc B和hly基因的表達水平都有較大幅度的上升;侵襲Hep G2細(xì)胞結(jié)果顯示act A基因缺失后侵襲能力增強、act A和inl B基因共同缺失后侵襲能力減弱。因此,減毒菌株的構(gòu)建及其生物特性研究不僅對食源性致病菌Lm致病機理具有重要意義,也為構(gòu)建預(yù)防人類和動物疫病的疫苗載體奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：現(xiàn)代食品科技. 2016,32(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 菌株、質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.3 雙缺失減毒株(Lm-Δact A/Δinl B)的構(gòu)建
        1.3.1 引物
        1.3.2 Lm-Δinl B菌株inl B基因缺失的驗證
        1.3.3 重組質(zhì)粒p KSV7-act A(P1/P4)的構(gòu)建
        1.3.4 減毒株Lm-Δact A/Δinl B的構(gòu)建
    1.4 減毒株Lm-Δact A/Δinl B生物特性研究
        1.4.1 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B的生長情況
        1.4.2 RT-PCR檢測Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B主要毒力基因表達檢測
        1.4.3 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δinl B、Lm-Δact A/Δinl B侵襲Hep G2細(xì)胞
    1.5 數(shù)據(jù)分析方法
2 結(jié)果與討論
    2.1 Lm-Δinl B菌株inl B基因缺失驗證結(jié)果
    2.2 重組質(zhì)粒p KSV7-act A(P1/P4)的構(gòu)建結(jié)果
    2.3 減毒株Lm-Δact A/Δinl B的構(gòu)建結(jié)果
    2.4 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B生長曲線
    2.5 Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B各毒力基因的表達水平
    2.6 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δinl B、Lm-Δact A/Δinl B對Hep G2細(xì)胞侵襲結(jié)果
3 結(jié)論



本文編號：3344618