細(xì)葉百合(Lilium pumilum 花下垂、花被片反卷、花朵嬌艷。是一種重要的觀賞性花卉,是百合抗性育種的重要親本。本研究從細(xì)葉百合轉(zhuǎn)錄組中篩選出WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族,分析該家族在休眠解除過程中的表達(dá)情況;從中選取對休眠解除具有調(diào)控作用的基因,分析其對非生物脅迫的響應(yīng);克隆該基因并對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析;構(gòu)建植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到煙草中;對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行干旱脅迫,通過對干旱脅迫下的表型觀察及生理指標(biāo)測定,明確該基因是否具有抗旱功能。本文主要研究結(jié)果如下:1.通過分析細(xì)葉百合休眠解除轉(zhuǎn)錄組中的WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族,從中共分離出了40個WRKY轉(zhuǎn)錄因子,其中GroupⅠ共有6個基因、GroupII共有28個基因、GroupⅢ有6個基因。隨著休眠解除LpWRKY20基因的相對表達(dá)量逐漸升高,證明其參與了休眠解除的過程。2.在休眠過程中往往伴隨著非生物的脅迫,熒光定量分析表明在不同的非生物脅迫中LpWRKY20表達(dá)量存在差異且在不同的組織器官中表達(dá)模式也不相同。干旱脅迫下LpWRKY20在鱗莖中出現(xiàn)了明顯的上調(diào)表達(dá),推測基因?qū)Ω珊档捻憫?yīng)較為敏感。3.該基因開放閱讀框（ORF）為1899bp,預(yù)... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１細(xì)葉百合ＷＲＫＹ轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)化樹??Ｆｉｇｕ?

２．２．４低溫儲藏不同吋期■相對表達(dá)量分析??采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法對細(xì)葉百合鱗莖在低溫貯藏Ｏｄ?（ＳＩ）、３０ｄ?（Ｓ２）、６０ｄ?（Ｓ３）、９０ｄ??（Ｓ４）期間Ｚｐ奶況７２０基因相對表達(dá)量進(jìn)行分析（圖２－４），結(jié)果表明，基??因在休眠解除的過程中表達(dá)量總體呈現(xiàn)上升的趨勢，在Ｓ１時期表達(dá)量較低，Ｓ２與Ｓ１??時期相對表達(dá)量基本保持一致，Ｓ３時期是Ｓ１時期的４．８倍，Ｓ４時期相對表達(dá)量顯著升??高

３．３．１干旱脅迫對的表達(dá)影響??在ＰＥＧ模擬干旱條件下，Ｚｐ奶？／了２０基因的表達(dá)模式在百合不同器官內(nèi)表現(xiàn)出差??異（圖３－１）。在葉片中隨著干旱時間的延長表達(dá)量總體呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，３ｈ時表達(dá)量最??低。ｌｈ、３ｈ表達(dá)量低于對照組；６ｈ、１２ｈ、２４ｈ表達(dá)量較之前有所提升，但依然低于對??照組；其后在４８ｈ表達(dá)量繼續(xù)下調(diào)。在鱗莖中隨著干旱時間的延長表達(dá)量呈現(xiàn)先增加后??降低的趨勢。ｌｈ時相對表達(dá)量與對照相比并無顯著變化；此后表達(dá)量逐漸升高，并在??６ｈ時達(dá)到頂峰，為對照組的２．６倍；１２ｈ、２４ｈ和４８ｈ又下調(diào)表達(dá)，但均高于對照組。在??根中隨著時間的延長表達(dá)量變化較小，僅在ｌｈ時表達(dá)量呈現(xiàn)明顯的下調(diào)，其余時間段??變化不明顯。Ｚｐ階兄ＳＴ２０基因在細(xì)葉百合遭受干旱脅迫時會產(chǎn)生調(diào)控反應(yīng)并在不同的組??織器官中呈現(xiàn)出差異性，在鱗莖中對干旱的響應(yīng)作用強于根、葉，表明在鱗??莖中具有明顯的調(diào)節(jié)作用。??３．５￣］??ａ??３－??．２?Ｂ?ａ??｜?＾?１?ａ??ｌ－?ａｆ?ｆ?Ｉ?｜ａ?Ｉ?！?ｊｌ??■ｌｉｌｌｉｌｒ??〇?；?￣￣＼￣￣１?＼￣￣＊??Ｏｈ?ｌｈ?３ｈ?６ｈ?１２ｈ?２４ｈ?４８ｈ??ｓｔｒｅｓｓ?ｔｉｍｅ?（ｈ）??圖３－１干旱脅迫下在細(xì)葉百合不同組織中的相對表達(dá)＃??不同小寫字母表示在ｐ＜〇．〇５水平上差異顯著

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]芍藥PlGA20ox基因的克隆及其在芽內(nèi)休眠解除進(jìn)程中的表達(dá)分析[J]. 韓璐璐,李俊杰,馬燕,國靜,郭先鋒.  植物生理學(xué)報. 2017(04)
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[9]赤霉素氧化酶PsGA20ox基因參與低溫誘導(dǎo)的牡丹內(nèi)休眠解除[J]. 張玉喜,張文超,李玉娥,劉春英,鄭國生,蓋樹鵬.  華北農(nóng)學(xué)報. 2014(03)
[10]球根植物休眠調(diào)控的分子機制研究進(jìn)展[J]. 劉芳,王家艷,周蘊薇.  草業(yè)學(xué)報. 2013(06)

博士論文
[1]擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子在非生物脅迫響應(yīng)中的功能研究[D]. 丁忠杰.浙江大學(xué) 2014

碩士論文
[1]細(xì)葉百合LpSVP基因的克隆及其對煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 汪王.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[2]百合（Lilium）生物學(xué)特性及遠(yuǎn)緣雜交不親和性的研究[D]. 樊金萍.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：3344252