竹黃菌是寄生于特定竹子上的病原真菌,也是我國一種重要的藥用真菌,其肉質子座竹黃是一種名貴稀有的中藥材,其主要代謝產物之一竹紅菌素具有抗菌,抗腫瘤,抗病毒等活性,且在光動力農藥、食品添加劑及色素等方面具有很好的應用前景。但目前關于竹黃菌代謝產物及代謝調控的研究報道較少。對竹黃菌內代謝產物的調控網絡進行研究具有十分重要的科學意義和社會應用價值。veA是真菌全局性調控因子,在次級代謝產物的合成、協(xié)調真菌形態(tài)發(fā)育及侵染宿主致毒致病等方面起到重要的調控作用。本研究以veA基因功能研究為出發(fā)點,建立竹黃菌原生質體制備和再生的適宜條件,構建veA敲除載體,運用PEG介導和農桿菌介導轉化探究竹黃菌的遺傳轉化體系;通過代謝組學的方法比較分析不同發(fā)育時期竹黃代謝產物的差異。主要研究結果如下:1、對影響竹黃菌原生質體質量和產量的穩(wěn)滲劑、酶解時間、酶液組合等條件進行優(yōu)化,獲得竹黃菌原生質體制備的最適條件為:取菌齡為5 d的菌絲,以0.6 mol/L NaCl配置1.5%崩潰酶+1%裂解酶的混合酶液,按20 mL酶液/1 g濕菌體比列,30℃酶解3 h可獲得7.8×10⁶個/mL原生質體。... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

【文章頁數】：97 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ShiraiaspSUPER-H168的形態(tài)結構A：隔膜菌絲體（2400×）；B：分生孢子器（2400×）；C：分生孢子器釋放分生孢子（1000×）；D：分生孢子（10,000×）（Liangetal.,2009）

與分析質體制備條件優(yōu)化劑種類對原生質體制備的影響滲劑對原生質體的釋放與再生活性有很大影響，穩(wěn)滲劑可以保生質體內外環(huán)境滲透壓平衡，使原生質體處于穩(wěn)定狀態(tài)，保持采用 0.7 mol/L NaCl，0.6 mol/L 山梨醇糖、蔗糖、葡萄糖作為穩(wěn)酶對培養(yǎng) 3d 的菌絲，30℃，100 r/min ，酶解 3 h 制備原生質，不同穩(wěn)滲劑對原生質體的制備具有一定的影響，當穩(wěn)滲劑為l 時，原生質體的產量最高（3.2×106個/ mL），以蔗糖為穩(wěn)滲0.6×106個/ mL）。

隨后降低（圖2-2），穩(wěn)滲劑過低不利于原生質的穩(wěn)定和活性；濃度過高，影響原生質體的釋放。故以 0.6 mol/L NaCl 為穩(wěn)滲劑制備竹黃菌原生質體。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3342702