竹黃菌是寄生于特定竹子上的病原真菌,也是我國一種重要的藥用真菌,其肉質(zhì)子座竹黃是一種名貴稀有的中藥材,其主要代謝產(chǎn)物之一竹紅菌素具有抗菌,抗腫瘤,抗病毒等活性,且在光動(dòng)力農(nóng)藥、食品添加劑及色素等方面具有很好的應(yīng)用前景。但目前關(guān)于竹黃菌代謝產(chǎn)物及代謝調(diào)控的研究報(bào)道較少。對竹黃菌內(nèi)代謝產(chǎn)物的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行研究具有十分重要的科學(xué)意義和社會(huì)應(yīng)用價(jià)值。veA是真菌全局性調(diào)控因子,在次級代謝產(chǎn)物的合成、協(xié)調(diào)真菌形態(tài)發(fā)育及侵染宿主致毒致病等方面起到重要的調(diào)控作用。本研究以veA基因功能研究為出發(fā)點(diǎn),建立竹黃菌原生質(zhì)體制備和再生的適宜條件,構(gòu)建veA敲除載體,運(yùn)用PEG介導(dǎo)和農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化探究竹黃菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系;通過代謝組學(xué)的方法比較分析不同發(fā)育時(shí)期竹黃代謝產(chǎn)物的差異。主要研究結(jié)果如下:1、對影響竹黃菌原生質(zhì)體質(zhì)量和產(chǎn)量的穩(wěn)滲劑、酶解時(shí)間、酶液組合等條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得竹黃菌原生質(zhì)體制備的最適條件為:取菌齡為5 d的菌絲,以0.6 mol/L NaCl配置1.5%崩潰酶+1%裂解酶的混合酶液,按20 mL酶液/1 g濕菌體比列,30℃酶解3 h可獲得7.8×10⁶個(gè)/mL原生質(zhì)體。... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ShiraiaspSUPER-H168的形態(tài)結(jié)構(gòu)A：隔膜菌絲體（2400×）；B：分生孢子器（2400×）；C：分生孢子器釋放分生孢子（1000×）；D：分生孢子（10,000×）（Liangetal.,2009）

與分析質(zhì)體制備條件優(yōu)化劑種類對原生質(zhì)體制備的影響滲劑對原生質(zhì)體的釋放與再生活性有很大影響，穩(wěn)滲劑可以保生質(zhì)體內(nèi)外環(huán)境滲透壓平衡，使原生質(zhì)體處于穩(wěn)定狀態(tài)，保持采用 0.7 mol/L NaCl，0.6 mol/L 山梨醇糖、蔗糖、葡萄糖作為穩(wěn)酶對培養(yǎng) 3d 的菌絲，30℃，100 r/min ，酶解 3 h 制備原生質(zhì)，不同穩(wěn)滲劑對原生質(zhì)體的制備具有一定的影響，當(dāng)穩(wěn)滲劑為l 時(shí)，原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高（3.2×106個(gè)/ mL），以蔗糖為穩(wěn)滲0.6×106個(gè)/ mL）。

隨后降低（圖2-2），穩(wěn)滲劑過低不利于原生質(zhì)的穩(wěn)定和活性；濃度過高，影響原生質(zhì)體的釋放。故以 0.6 mol/L NaCl 為穩(wěn)滲劑制備竹黃菌原生質(zhì)體。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]竹黃遺傳多樣性與竹紅菌素合成和抗癌作用的研究進(jìn)展[J]. 趙寧,陳雙林.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(04)
[2]冠突曲霉veA基因缺失型與野生型的差異代謝物研究[J]. 任春光,譚玉梅,任秀秀,王亞萍,劉永翔,劉作易.  菌物學(xué)報(bào). 2018(02)
[3]基因敲除技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 高宇,程潛,張夢君,朱振宇,胡婷婷,楊宇.  農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備. 2017(08)
[4]繡球菌原生質(zhì)體制備及再生條件的初步研究[J]. 寧萌,向凌云,馮菲,刁文濤,陳曉飛.  河南科學(xué). 2017(07)
[5]黃酮類化合物合成途徑及合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 鄒麗秋,王彩霞,匡雪君,李瀅,孫超.  中國中藥雜志. 2016(22)
[6]過表達(dá)veA對橘青霉美伐他汀生物合成的影響[J]. 曹雙,鄭躍亮,張虎,黃宇琪,廖國建,胡昌華.  西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[7]兒茶酚脅迫下銅綠微囊藻的生理生化響應(yīng)[J]. 李延,劉麗君,梁文艷.  環(huán)境工程學(xué)報(bào). 2016(06)
[8]竹黃菌原生質(zhì)體的制備與再生分析[J]. 魏洪美,任錫毅,楊兵,黃青青,劉永翔,乙引.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016(04)
[9]PEG介導(dǎo)的蘋果果生刺盤孢Colletotrichum fructicola原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化[J]. 韓小路,白靜科,張瑋,張榮,孫廣宇.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2016(03)
[10]竹黃菌Ku70基因全長克隆及序列分析[J]. 黃青青,任錫毅,譚玉梅,魏洪美,乙引,劉永翔.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(12)

碩士論文
[1]產(chǎn)去乙酰真菌環(huán)氧二烯（DAM）菌株全局性調(diào)控因子veA的克隆及功能驗(yàn)證[D]. 康燦昆.福建師范大學(xué) 2014
[2]一株產(chǎn)石杉堿甲蛇足石杉內(nèi)生真菌的分離及其發(fā)酵條件的初步研究[D]. 王吉祥.江西師范大學(xué) 2010
[3]竹黃菌（Shiraia bambusicola）生物學(xué)性狀及其人工培養(yǎng)技術(shù)研究[D]. 林海萍.浙江大學(xué) 2002



本文編號：3342702