低溫是限制植物分布,影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素。植物處于低溫環(huán)境中時(shí),最初感知到冷信號(hào)后,機(jī)體在Ca²⁺、激素（如ABA）以及各種滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)水平上發(fā)生變化。這些變化通過一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),最終誘導(dǎo)冷調(diào)節(jié)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的啟動(dòng),從而調(diào)控植物機(jī)體的抗冷性。在冷脅迫響應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用不僅包括這些生理指標(biāo),還有各種轉(zhuǎn)錄因子的參與。FAD2基因是編碼脂肪酸脫氫酶的基因。在高等植物中,FAD2基因大多都存在2個(gè)以上的拷貝,且不同拷貝的FAD2基因的表達(dá)模式以及功能也各不相同。植物中的FAD2基因分為兩類:一類為組成性表達(dá)的,主要參與膜脂中不飽和脂肪酸的合成;另一類為種子特異性表達(dá)的,主要在儲(chǔ)藏脂不飽和脂肪酸合成過程中發(fā)揮作用。前期研究中,本實(shí)驗(yàn)室已得到兩個(gè)拷貝的FAD2基因（AhFAD2A和AhFAD2B）,這兩個(gè)基因中存在著可變剪接,其中已確定在種子中表達(dá)的A2和B2剪接體參與儲(chǔ)藏脂不飽和脂肪酸的合成。A4B4剪接體為組成性表達(dá),推測(cè)該剪接體與膜脂的合成有關(guān)。另外,在花生基因組中可能還存在著其他拷貝的FAD2�；谶@些問題,對(duì)花生ESTs數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了比對(duì)分析,通過拼接序列的... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥中冷響應(yīng)轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)示意圖

3.1 酵母單雜交技術(shù)的原理酵母單雜交技術(shù)是研究 DNA（順式作用元件）與蛋白質(zhì)（轉(zhuǎn)錄因子）相互作用的主要方法之一。酵母中有一種特殊的轉(zhuǎn)錄因子 GAL4 蛋白，在這個(gè)蛋白中包含兩部分特殊的結(jié)構(gòu)域，DNA 結(jié)合區(qū)（DNA binding domain，BD）和目的基因轉(zhuǎn)錄激活區(qū)（aviting domain，AD），兩個(gè)結(jié)構(gòu)域能夠各自行使功能，但只有在兩者相互結(jié)合的條件下才能引起下游基因的表達(dá)。酵母單雜交就依賴于此基礎(chǔ)上延伸而來。在酵母單雜交體系中，通過構(gòu)建包含 GAL4 蛋白中的 AD 的 cDNA文庫質(zhì)粒，同時(shí)將目的基因片段以及下游報(bào)告基因包含在含有 BD 結(jié)構(gòu)域的誘餌載體上。把含有 AD 和 BD 的兩部分表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞中后， BD 中的下游報(bào)告基因的表達(dá)被啟動(dòng)，與目的基因發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì)在 cDNA 文庫中就被篩選出來。

FAD2-2 基因的克隆FAD2-2 基因 cDNA 序列的獲得花生（Arachis hypogaea. L.，AABB）組中存在 AhFAD2A 和 AhFAD2Bcbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）下載花生 ES contig express 軟件進(jìn)行拼接后，獲得中 2 條分別對(duì)應(yīng) AhFAD2A 和 AhFAD碼一個(gè)新的 AhFAD2 基因。生物信息學(xué)所獲得的序列，設(shè)計(jì)特異性rfF 和 AhFAD2-2orfR。以花生（魯花為模板，擴(kuò)增目的 cDNA 序列，得到一

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低溫條件下拔節(jié)期小麥葉片內(nèi)源激素含量和抗氧化酶活性的變化[J]. 李春燕,徐雯,劉立偉,楊景,朱新開,郭文善.  應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào). 2015(07)
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博士論文
[1]紅花FAD2基因家族的克隆及高油酸紅花分子機(jī)制研究[D]. 曹世江.東北師范大學(xué) 2013

碩士論文
[1]低溫下冷敏感植物春小麥和抗寒植物冬小麥細(xì)胞內(nèi)Ca～（2+）的穩(wěn)態(tài)平衡能力的比較研究[D]. 劉煒.山東師范大學(xué) 2000



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