弧菌（Vibrio）屬革蘭氏陰性菌,分布廣泛,部分條件致病菌屬于食源性致病菌,嚴重威脅著水產(chǎn)品安全以及人類健康。目前抗菌藥物仍然是治療弧菌性疾病的主要方法,但隨著抗菌藥物的不合理使用或者大面積使用,造成弧菌對部分藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥性。因此,需要進行水產(chǎn)養(yǎng)殖源弧菌耐藥性監(jiān)測研究,為有效控制弧菌對抗菌藥物的耐藥性提供理論依據(jù)。為了解上海郊區(qū)、江蘇、福建以及海南四個地區(qū)養(yǎng)殖源弧菌的流行情況及抗菌藥物的耐藥情況,對采集的菌株進行分離鑒定;其次檢測養(yǎng)殖對蝦源副溶血弧菌對抗菌藥物的敏感性,并檢測其耐藥基因的攜帶率,旨在了解四個地區(qū)養(yǎng)殖對蝦源中副溶血弧菌的流行情況,耐藥基因的攜帶率以及耐藥表型與基因型的相關(guān)性,為水產(chǎn)養(yǎng)殖中副溶血弧菌的病害防治以及副溶血弧菌中耐藥機制的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù);最后對36株副溶血弧菌及采自江蘇贛榆的創(chuàng)傷弧菌和鰻弧菌中qnr VC基因進行檢測及基因定位,可轉(zhuǎn)移性評價以及基因環(huán)境分析,了解qnr VC基因在弧菌中的流行情況,解析qnr VC基因的遺傳背景及其轉(zhuǎn)移機制,為水產(chǎn)養(yǎng)殖源耐藥弧菌以及耐藥基因傳播擴散的防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。1.養(yǎng)殖源弧菌的流行情況調(diào)查本實驗從四個地區(qū)共... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

弧菌gyrB基因PCR擴增產(chǎn)物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文92.3.1弧菌的分離純化結(jié)果弧菌在TCBS選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)之后，顯示菌落顏色為綠色，黃色或者黃綠色，呈圓形中間凸起的形態(tài)。PCR擴增gyrB基因和HSP60基因，電泳檢測（圖2-1，2-2）分別得到1040bp和550bp大小的條帶。測序結(jié)果經(jīng)NCBI比對之后，與生化鑒定結(jié)果相符合。圖2-1弧菌gyrB基因PCR擴增產(chǎn)物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.M：DNAMarkerDL2000圖2-2弧菌HSP60基因PCR擴增產(chǎn)物Fig2-2.PCRamplificationproductsofHSP60geneofVibriosp.M：DNAMarkerDL20002.3.2弧菌的鑒定結(jié)果本實驗2017-2019年從上海郊區(qū)、江蘇、福建及海南等地區(qū)患病養(yǎng)殖場分離到的細菌進行鑒定，發(fā)病動物包括南美白對蝦、銹斑蟳、綠鰭馬面鲀、大菱鲆、淡水七彩神仙魚等水生動物，共鑒定出70株弧菌，涉及弧菌屬的10個種（表2-2），其中分離最多的是副溶血弧菌，為36株，占總量的51.4%，其次為哈維氏弧菌，19株，占27%，其余鑒定出來的8種弧菌種數(shù)量量比較少。不同地區(qū)分離到的弧

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文32dH2O39μL合計50μL4.3.2.3qnrVC9敲除菌株的效果驗證檢測qnrVC9基因敲除菌株對喹諾酮類藥物的MIC值，同時使用PCR方法檢測qnrVC基因，方法同4.2，驗證qnrVC基因敲除效果。4.4實驗結(jié)果4.4.1qnrVC基因的檢測結(jié)果根據(jù)第三章中副溶血弧菌檢測qnrVC基因的攜帶情況，結(jié)果顯示有26株副溶血弧菌攜帶qnrVC基因，創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌兩株弧菌均呈陽性，qnrVC基因經(jīng)PCR擴增后的電泳結(jié)果如圖4-1所示。將測序結(jié)果在NCBI上進行Blast比對分析，結(jié)果顯示26株副溶血弧菌陽性中21株攜帶的是qnrVC6等位基因，5株攜帶的是qnrVC3等位基因，創(chuàng)傷弧菌和鰻弧菌的qnrVC基因與qnrVC9基因的序列相似度達99%（圖4-2-1、圖4-2-2）。圖4-1部分弧菌qnrVC基因PCR擴增產(chǎn)物Fig2-2.PCRamplificationproductsofqnrVCgeneofsomeVibriosp.M：DNAMarkerDL2000

【參考文獻】：
期刊論文
[1]MALDI-TOF-MS檢測哈維弧菌前處理條件的探索及聚類分析[J]. 武靜,陳英劍,李繼霞,胡成進.  國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2020(01)
[2]平湖市市售水產(chǎn)品中致病性弧菌檢測結(jié)果[J]. 陸飛越,王建華,馬春曉,張軍,董麗娟.  預(yù)防醫(yī)學(xué). 2020(01)
[3]寧波地區(qū)腹瀉患者副溶血弧菌毒力基因及耐藥性分析[J]. 謝紅意,葉鴻雁,周方滿,施露梅,葛婷婷,樂旭波.  檢驗醫(yī)學(xué). 2019(02)
[4]大菱鲆源鰻弧菌的分離鑒定及藥敏分析[J]. 欒林林,張永剛,王鳳軍,任媛,任海,李強,靳曉敏.  飼料工業(yè). 2018(22)
[5]廣西凡納濱對蝦源副溶血弧菌耐藥性和耐藥基因的檢測[J]. 黃偉德,肖雙燕,黎姍梅,黃德生,張振豪,鐘昌艷,陳福彩,梁毅,梁靜真,黃鈞.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2018(09)
[6]副溶血弧菌耐藥及其機制的研究進展[J]. 張德福,安慧,張健,趙禹宗,張明,郭佳佳,馮嬌,劉雪飛,李春,白鳳翎,李鈺金,殷喆,勵建榮.  食品工業(yè)科技. 2018(09)
[7]磺胺類抗性基因的產(chǎn)生及演變研究進展[J]. 汪濤,楊再福,陳勇航,孫冉冉,張姚姚,王亞楠.  環(huán)境污染與防治. 2017(11)
[8]2016年濰坊市市售動物性水產(chǎn)品中副溶血性弧菌和創(chuàng)傷弧菌污染狀況研究[J]. 趙忠俊,于明明,王曉威,肖林,張康,陳婕,梁永柱.  預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇. 2017(04)
[9]開封市13株創(chuàng)傷弧菌分離株耐藥性及PFGE分型研究[J]. 黃淑華,刁保衛(wèi),陳磊,劉杰,張春艷,閻學(xué)燕,許嬌,鞏飚.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2016(12)
[10]2012年～2014年南海海水養(yǎng)殖魚類病原菌哈維弧菌分離株的耐藥性分析[J]. 蔣魁,徐力文,蘇友祿,王雨,郭志勛,許海東,高芳,馮娟.  南方水產(chǎn)科學(xué). 2016(06)

博士論文
[1]食品中弧菌的耐藥性和致病性研究[D]. 鄭志偉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019

碩士論文
[1]海水養(yǎng)殖源弧菌耐藥性調(diào)查及qnrVC基因在弧菌中的流行情況研究[D]. 劉旭.上海海洋大學(xué) 2016
[2]海水弧菌耐藥性I類整合子分析與副溶血弧菌分子分型研究[D]. 李林桂.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3340307