我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖第一大國,對蝦養(yǎng)殖是水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)�？股乇粡V泛用于預(yù)防和治療對蝦易患的細(xì)菌性疾病。由于抗生素的濫用,對蝦養(yǎng)殖環(huán)境和對蝦體內(nèi)抗生素污染嚴(yán)重,誘導(dǎo)了大量有抗生素抗性的細(xì)菌（Antibiotics resistance bacterium,ARB）及抗生素抗性基因（Antibiotics resistance genes,ARGs）的產(chǎn)生。ARGs普遍存在于養(yǎng)殖環(huán)境和養(yǎng)殖品體內(nèi),對蝦腸道中ARGs污染所帶來的食品安全性問題嚴(yán)重威脅著人類健康。因此研究ARGs在對蝦腸道中的多樣性,比較其在對蝦養(yǎng)成期與成熟期的變化情況,分析其在健康對蝦與患病對蝦中的差異性,可以為對蝦養(yǎng)殖合理用藥提供指導(dǎo)并對市售對蝦安全性評價提供重要參考。本課題采用傳統(tǒng)分子生態(tài)學(xué)方法、傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)方法和宏質(zhì)粒組高通量測序分析方法對對蝦腸道ARGs多樣性進(jìn)行研究。以廣州市4個水產(chǎn)市場所售南美白對蝦為實驗材料,提取腸道微生物總基因組DNA,用PCR和Q-PCR手段確定ARGs的種類和基因豐度。篩選純化4類ARB并進(jìn)行種屬鑒定,確定ARB的抗生素抗性表現(xiàn)型和其所攜帶的ARGs基因型。建立了腸道微生物總質(zhì)粒組提取方... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各樣品腸道微生物總基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

25圖 2-2 30 個 ARGs 的 PCR 擴(kuò)增電泳檢測結(jié)果. 2-2 The agARGse gel electrophoresis results of 30 ARGs from genomic DNA(a:tracycline, from left to right,tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG, tetG′, tetK, tetL, tetMtetP, tetQ, tetS, tetX; b: ARGs of sulfonamides, 1, sulⅠ, 2, sulⅡ, 3, sulⅢ; c: ARGsquinolones, 1, qnrA, 3, qnrA′, 5, qnrB, 7, qnrS, 2, 4, 6, 8. blank control; d: ARGsolide, 1, ermB, 3, ermC, 5, ermF, 2, 4, 6, blank control; e: ARGs of β-lactams, 1, 2, blaSHV, 3, blaNDM,2, 4, 6, blank control)

第二章 對蝦腸道中 ARGs 多樣性分析M 1 2 3 4M 1 2 3 42.4.2.2 對 4 個樣品的 tetA、tetB、tetC、tetE、sulⅠ、sulⅡ、qnrS、ermB 基因的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果對蝦養(yǎng)殖中常用的抗生素有四環(huán)素類、磺胺類、喹諾酮類和大環(huán)內(nèi)酯類。根據(jù) 30種 ARGs 的 PCR 初步檢測結(jié)果，挑選檢出率高，擴(kuò)增效果好，引物特異性高，具有代表性的 4 類 ARGs(tetA、tetB、tetC、tetE、sulⅠ、sulⅡ、qnrS、ermB)共 8 個基因進(jìn)行進(jìn)步分析。分別以 4 個樣品總基因組 DNA 為模板，對 8 個 ARGs 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)，PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖 2-3 所示。


本文編號：3339456