發(fā)布時(shí)間：2021-08-12 17:46

　　鑒定和分析肝癌細(xì)胞中新的天然反義RNA MEF2D-AS根據(jù)已建立的雙鏈RNA文庫(kù)篩選與肝癌相關(guān)的反義RNA.通過(guò)RT-qPCR驗(yàn)證其反義RNA的存在,采用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)獲得其全長(zhǎng)序列,并檢測(cè)HepG2細(xì)胞經(jīng)5-Aza-dC處理前后MEF2D基因正反義鏈表達(dá)量的變化.結(jié)果顯示,成功鑒定出1條全長(zhǎng)為1 265bp的新的天然反義RNA,并預(yù)測(cè)其屬于長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,簡(jiǎn)稱(chēng)為lncRNA）,命名為MEF2D-AS.經(jīng)5-Aza-dC處理后,MEF2D-AS的表達(dá)量升高,而MEF2DmRNA的表達(dá)量降低.證實(shí)了MEF2D-AS的存在并預(yù)測(cè)其屬于長(zhǎng)鏈非編碼RNA,且與MEF2D正反義RNA是反相關(guān)關(guān)系.此研究結(jié)果可為進(jìn)一步探討肝癌發(fā)生機(jī)制提供參考. 

【文章來(lái)源】：安徽大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017,41(06)北大核心

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【部分圖文】：

圖１ＭＥＦ２Ｄ基因的反義ＲＮＡ驗(yàn)證Ｍ：２０ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ；Ｓ：正義鏈ＲＮＡ；ＡＳ：反義鏈ＲＮＡ；＋：加反轉(zhuǎn)錄酶；－：無(wú)轉(zhuǎn)錄酶．

ＮＡ．通過(guò)ＢＬＡＳＴ發(fā)現(xiàn)ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳ基因轉(zhuǎn)錄起始于ＭＥＦ２Ｄ的第８?jìng)�(gè)內(nèi)含子第１００位堿基的反義鏈配對(duì)堿基，與ＭＥＦ２Ｄ第８?jìng)�(gè)外顯子完全重疊（２４１ｂｐ），如圖３所示．Ｍ：２０ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ；Ｓ：正義鏈ＲＮＡ；ＡＳ：反義鏈ＲＮＡ；＋：加反轉(zhuǎn)錄酶；－：無(wú)轉(zhuǎn)錄酶．圖１ＭＥＦ２Ｄ基因的反義ＲＮＡ驗(yàn)證Ｍ：４５００ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ；５′ＲＡＣＥ：５′端擴(kuò)增產(chǎn)物；３′ＲＡＣＥ：３′端擴(kuò)增產(chǎn)物．圖２ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳＲＡＣＥ瓊脂糖凝膠電泳圖圖３ＵＣＳＣＧｅｎｏｍｅＢｒｏｗｓｅｒ比對(duì)結(jié)果通過(guò)設(shè)計(jì)特異性逆轉(zhuǎn)錄引物（引物序列如表３所示），合成ｃＤＮＡ．特異性ＰＣＲ產(chǎn)物用１％的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定和ＤＮＡ序列測(cè)定，結(jié)果如圖４～５所示．１０５第６期李華玲，等：肝癌相關(guān)基因ＭＥＦ２Ｄ反義ＲＮＡ的鑒定及分析

表３ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳ全長(zhǎng)鑒定引物序列引物名稱(chēng)引物序列特異性逆轉(zhuǎn)錄引物５′－ＧＧＴＧＧＴＴＴＴＴＡＡＡＡＡＴＡＧＴＧＴＴＧＡＡＣ－３′下游５′－ＣＴＣＴＴＧＧＴＣＧＧＡＴＧＣＧＧＴ－３′上游５′－ＣＡＧＡＧＧＧＧＧＴＧＡＧＴＧＡＣＡＧＡＡ－３′Ｍ：２０００ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ；ＲＴ：特異性逆轉(zhuǎn)錄；＋：加反轉(zhuǎn)錄酶；－：不加反轉(zhuǎn)錄酶．圖４ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳ全長(zhǎng)序列鑒定圖５ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳｃＤＮＡ序列２．３５－Ａｚａ－ｄＣ處理對(duì)ＭＥＦ２Ｄ基因正反義ＲＮＡ表達(dá)的影響通過(guò)ＲＴ－ｑＰＣＲ來(lái)檢測(cè)５－Ａｚａ－ｄＣ處理前后ＭＥＦ２ＤｍＲＮＡ與ＭＥＦ２Ｄ－ＡＳＲＮＡ在肝癌細(xì)胞ＨｅｐＧ２中的表達(dá)情況，結(jié)果如圖６所示．１０６安徽大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）第４１卷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長(zhǎng)鏈非編碼RNA在肝癌中的研究進(jìn)展[J]. 龔艷清,韓濤,章坤,張倩.  山東醫(yī)藥. 2016(10)
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本文編號(hào)：3338780